[发明专利]促进灵芝次生代谢产物合成的细胞培养方法

权利要求书

1.一种促进灵芝次生代谢产物生物合成的细胞培养方法，包括将灵芝菌种接种到斜面培养基进行培养，再依次进行一级液体种子培养、二级液体种子培养和液体深层发酵，其特征在于：在液体深层发酵过程中向发酵液中添加由真菌菌丝体所制备的诱导子以诱导灵芝次生代谢产物的生物合成。

2.按照权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于：在灵芝细胞对数生长期的末期向发酵液中加入由真菌菌丝体所制备的诱导子。

3.按照权利要求2所述的细胞培养方法，其特征在于：在液体深层发酵的第8天向发酵液中加入60毫摩尔/升的由真菌菌丝体所制备的诱导子。

4.按照权利要求1-3任何一项所述的细胞培养方法，其特征在于：所述的由真菌菌丝体所制备的诱导子是全成分诱导子、多糖蛋白诱导子或多糖诱导子。

5.按照权利要求4所述的细胞培养方法，其特征在于：所述的全成分诱导子的制备方法包括：菌丝体过滤收集并用去离子水冲洗两次，然后浸泡于醋酸盐缓冲液中匀浆，匀浆液高速离心，取上清液，高压灭菌，即得。

6.按照权利要求4所述的细胞培养方法，其特征在于：所述的多糖蛋白诱导子的制备方法包括：将菌丝体浸泡于醋酸盐缓冲液中匀浆，然后加入乙酸乙酯进行混合，室温下静置；减压抽滤，滤渣加入去离子水，高压灭菌，悬浮液过滤，取滤液，即得。

7.按照权利要求4所述的细胞培养方法，其特征在于：所述的多糖诱导子的制备方法包括：取菌丝体用去离子水冲洗两次，烘干，研磨成粉末加入乙醇室温下浸泡；混合物减压抽滤取滤渣，加入氯仿，回流提取，残留物用丙酮冲洗并风干；向所得到的干物质加入稀盐酸，高压灭菌，悬浮液再过滤，取滤液，即得。

8.按照权利要求1-3任何一项所述的细胞培养方法，其特征在于，所述的真菌选自橘青霉(Penicillium citrinum)、中国块菌(Tubersinense)、德国块菌(Tuber aestivumvittad)或黑孢块菌(Tuber melanosporum)。

9.权利要求1-3任何一项所述的细胞培养方法所培养得到的产物。