[发明专利]采用间充质干细胞制备真皮乳头组织的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于制备具有毛囊诱导能力的真皮乳头组织的方法。

背景技术

除其他细胞之外，毛囊通过上皮和真皮之间的相互作用得以形成并维持， 并且已经指出真皮乳头在毛囊的生长中起着关键作用(Cohen J.，J Embryol Exp Morphol.9：117-27，1961；Oliver RF，J Embryol Exp Morphol.15(3)：331-47，1966； 以及Oliver RF.，J Embryol Exp Morphol.18(1)：43-51，1967)。在毛囊中，真皮乳头 与外根鞘相互作用以诱导毛发形成和生长，并且保持由生长期、中间期以及终 止期构成的毛发周期。在由遗传、雄性激素或压力引起的脱发的发展中，真皮 乳头逐渐退化，导致毛囊变性。

有几种脱发形式，包括男性型或女性型脱发以及斑秃。在过去，脱发通常 通过将人造毛发植入头皮的毛囊根球(root bulbs)来治疗，但是这样的人造毛 发植入方法导致一些严重问题，并且现在这样的方法已经被禁用。当前，有两 种治疗脱发的方法：药物或天然物质治疗，以及人发(human hair)移植。药物 或天然物质治疗可以阻止脱发进展或防止将来的毛发丧失，但当长期使用之后 停止给药时，可能加速毛发丧失。另一方面，人发移植涉及从枕部毛发生长区 取数簇天然毛发，并将它们移植至光秃区。尽管移植的毛发作为完整的毛囊安 置于移植区，且成为经历正常生长周期的永久性毛发，但是待移植的毛发数量 非常有限，且在每次手术移植约2000根毛发丝的情况下，通常不可能实施超过 三次这样的手术。因此，当前用于治疗脱发的方法具有许多局限性，为了克服 这些问题，许多研究者已经尝试通过体外培养毛囊细胞并在治疗区移植它们来 恢复毛囊。

当从毛囊分离的真皮乳头细胞被培养出时，它们显示了与皮肤的成纤维细 胞相似的结构。这些培养的乳头细胞具有诱导毛囊形成的能力，这得到培养过 程中所述细胞倾向于聚集这一事实的支持。换句话说，与皮肤的成纤维细胞不 同，真皮乳头细胞在培养的起始阶段相互聚集。然而，所述能力并非被无限维 持，且Reynolds等人已经报道，当在体外培养真皮乳头细胞时，在约3至4个 传代数之后，真皮乳头细胞逐渐丧失其先天的毛囊诱导能力(Reynolds AJ等人， Development.122(10)：3085-94，1996)。另一方面，Jahoda和Reynolds等人已经 报道，当将培养了等于或少于3个传代数的大鼠触须毛真皮乳头细胞植入大鼠 的小耳皮肤伤口和背部时，从移植位点反常地出现了显示触须毛型特征的大毛 纤维(Jahoda CA.，Development.115(4)：1103-9，1992；和Reynolds AJ.等人， Development.115(2)：587-93，1992)。上述报道表明，为了获得用于移植的大量细 胞，真皮乳头细胞的初期培养阶段应该短暂且高效。

通常，原代培养的产率随着从中获得培养细胞的源组织或器官的年龄增长 而减少。因此，为了用于毛发再生的细胞治疗，研究者已经将他们的注意力从 分化细胞转移至胚胎干细胞或成人干细胞。例如，Kataoka等人已经报道，当移 植从源于小鼠骨髓的间充质干细胞和胎儿的上皮/真皮细胞的混合物获得的漂浮 细胞时，出现具有毛发生长的皮肤再生，并且在毛囊中发现所移植的间充质干 细胞的特异性标志物。该观察结果表明，间充质干细胞也可以有效地用于毛发 再生。另外，Richardson等人已经报道，毛囊真皮细胞可以分化成脂肪细胞和骨 细胞，Martin等人已经报道，源于骨髓的间充质干细胞和毛囊真皮干细胞均分 化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞以及肌细胞。

本发明的发明人注意到了这样的事实，即，源自骨髓、脂肪或脐带的间充 质干细胞具有与构成真皮乳头和真皮鞘的细胞相似的特征，因此，本发明的发 明人已尝试开发一种用于体外重构真皮乳头组织的有效方法。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种用于体外制备具有毛囊诱导能力的真 皮乳头组织的方法。

根据本发明的一个方面，提供了一种用于制备大量真皮乳头组织的方法， 所述方法包括以下步骤：

1)在第一培养基(first culture medium)中培养间充质干细胞，该第一培养 基含有600至1900mg/l的氨基酸和12至36mg/l的维生素；