[发明专利]采用间充质干细胞制备真皮乳头组织的方法

权利要求书

1.一种用于制备真皮乳头组织的方法，所述方法包括以下步骤：

1)在第一培养基中培养源自骨髓、脂肪组织或脐带的间充质干细胞，该第 一培养基含有600至1900mg/l的氨基酸和12至36mg/l的维生素，所述第一培 养基选自由DMEM(Dulbecco′s Modified Eagle Medium)、DMEM/F-12、F-12、 McCoy’s 5A、RPMIl 640、Williams’medium E以及IMDM(Iscove’s Modified  Dulbecco′s Medium)组成的组；

2)在含有2000至3000mg/l氨基酸和40至60mg/l维生素的第二培养基中 培养在步骤1)中获得的细胞，所述氨基酸包括：各30至200mg/l的L-精氨酸、 L-天门冬酰胺、L-天门冬氨酸、L-胱氨酸·2HCl、L-异亮氨酸、L-亮氨酸和L-赖 氨酸·HCl；各30至210mg/l的L-苯丙氨酸、L-色氨酸以及L-酪氨酸；以及各 50至600mg/l的L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-甘氨酸、L-组氨酸、L-甲硫氨酸、L- 脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸和L-缬氨酸，所述维生素包括各0.01至2mg/l的 生物素、D-Ca泛酸盐和核黄素；各3至16mg/l的氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、 吡哆醇·HCl以及硫胺素·HCl；10至15mg/l的无旋光肌醇；和0.02至0.03mg/l 的维生素B₁₂，其中，所述第二培养基补充有干细胞生长因子HGF且不含血清；

3)将胰蛋白酶或胶原蛋白酶添加至步骤2)中获得的培养物，以使得细胞 团块从培养皿分离，并经历自动聚集，以形成真皮乳头组织；以及

4)收获步骤3)中获得的真皮乳头组织，并在第二培养基中培养该组织。

2.根据权利要求1的方法，其中，在步骤1)中培养所述间充质干细胞达 1至20传代数。

3.根据权利要求1的方法，其中，以范围为1至1000ng/ml的量应用所述 HGF。

4.根据权利要求1的方法，其中，所述第二培养基包含：各30至200mg/l 的L-精氨酸、L-天门冬酰胺、L-天门冬氨酸、L-胱氨酸·2HCl、L-异亮氨酸、L- 亮氨酸以及L-赖氨酸·HCl；各30至210mg/l的L-苯丙氨酸、L-色氨酸以及L- 酪氨酸；各50至600mg/l的L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-甘氨酸、L-组氨酸、L-甲 硫氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸以及L-缬氨酸；各0.01至2mg/1的生 物素、D-Ca泛酸盐以及核黄素；各3至16mg/l的氯化胆碱、叶酸、烟酰胺、 吡哆醇·HCl以及硫胺素·HCl；10至15mg/l的无旋光肌醇；0.02至0.03mg/l的 维生素B₁₂；400至600mg/l的谷氨酰胺；1500至3000mg/l的D-葡萄糖；3000 至3500mg/l的碳酸氢钠(NaHCO₃)；2000至2500mg/l的HEPES(N-[2-羟乙基] 哌嗪-N′-[2-乙磺酸])；1.0至2.0mM的Ca；0.5至1.0mM的Mg；各0.25至0.7 nM的Cu、Fe、Mn以及Zn；以及4000至5000mg/l的氯化钠。

5.根据权利要求1的方法，其中，所述第二培养基还包含胰岛素、转铁蛋 白、亚硒酸钠、皮质甾醇以及白蛋白。

6.根据权利要求1的方法，其中，所述真皮乳头组织是由所述间充质干细 胞分化的细胞构成的聚集体。