[发明专利]检测甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌的方法以及用于所述方法的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.MRSA引物组在制备用于检测样品中甲氧西林抗性金黄色葡萄 球菌(MRSA)的存在或不存在的方法的试剂盒中的用途，所述方法包 括

(a)进行扩增步骤，包括用MRSA引物组接触所述样品来产生扩 增产物，如果MRSA存在于所述样品中，

(b)进行杂交步骤，包括用MRSA探针对接触步骤(a)的所述扩 增产物，其中MRSA探针对的第一MRSA探针是用供体荧光部分标记 的，以及其中所述MRSA探针对的第二MRSA探针是用相应的接受体 荧光部分标记的；以及

(c)检测所述第一MRSA探针的供体荧光部分和所述第二MRSA 探针的接受体荧光部分之间荧光共振能量转移(FRET)的存在或不存 在，其中FRET的存在是样品中存在MRSA的指示，以及其中FRET的 不存在是样品中不存在MRSA的指示，

其中所述方法能够检测MRSA的I到V型葡萄球菌染色体盒 (SCCmec)的每一种，以及

其中所述引物组包括

(i)特异于RE2型MRSA的引物，即包含或由核酸序列5’-TGA AAT  GAA AGA CTG CGG AG-3’(MRSA direct RE2fwd；SEQ ID NO：92)组成的引 物；

知

(ii)特异于RE3型MRSA的引物，即包含或由核酸序列5’-CCA  CAT CTC ATT AAA TTT TTA AAT TAT ACA C-3’(MRSA direct RE3fwd； SEQ ID NO：93)组成的引物；

和

(iii)特异于RE7型MRSA的引物，即包含或由核酸序列5’-CAA  TCC TTT TTA TAT TTA AAA TAT ATT ATA CAC-3’(MRSA direct RE7fwd； SEQ ID NO：94)组成的引物。

2.权利要求1的用途，其中所述引物组另外包含特异于甲氧西林抗性 金黄色葡萄球菌(MRSA)以及甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌(MSSA) 的另外的引物。

3.权利要求2的用途，其中所述另外的引物包含或由核酸序列5’- CAA GGA AAG ATG CTA TCT TCC G-3’(MRSA direct rev；SEQ ID NO： 95)组成。

4.权利要求1或2的用途，其中所述引物组由最多4或5个引物组 成。

5.权利要求1或2的用途，其中所述引物组包含或由以下组成： MRSA direct RE2fwd、MRSA direct RE3fwd和MRSA direct RE7fwd 和反向引物。

6.权利要求1或2的用途，其中所述反向引物是MRSA direct rev。

7.权利要求1或2的用途，其中所述探针对的至少一个探针包含或由 荧光部分和核酸序列组成，所述核酸序列选自

5’-AAG TCG CTT TGC CCT TGG G-3’(MRSA direct Fluos w／o label； SEQ ID NO：96)，和

5’-CAT GCG TTG GTT CGA TTC TTG-3’(MRSA direct Red610w／o  label；SEQ ID NO：97)。

8.权利要求1或2的用途，其中包括第一标记物的第一探针是 5’-AAG TCG CTT TGC CCT TGG G-3’-荧光素(MRSA direct Fluos)和 其中包括第二标记物的第二探针是LC-Red610-5’-CAT GCG TTG GTT  CGA TTC TTG-3’(MRSA direct Red610)。

9.权利要求1或2的用途，其中MRSA探针对的成员在相互不超 过五个、四个或三个核苷酸之内与扩增产物杂交。