[发明专利]制备和纯化因子VIII及其衍生物的方法有效
| 申请号： | 200780051622.5 | 申请日： | 2007-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN101646779A | 公开（公告）日： | 2010-02-10 |
| 发明（设计）人： | 宋寅瑛;金薰泽;金钟完;金龙局;刘钟日;金大起 | 申请（专利权）人： | SK化学株式会社 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C07K14/755 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 | 代理人： | 李 瑛 |
| 地址： | 韩国*** | 国省代码： | 韩国;KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 纯化 因子 viii 及其 衍生物 方法 | ||
1.分子量是500kDa的硫酸葡聚糖用于降低或阻断源自CHO细胞培养基 的某些蛋白酶的因子VIII切割活性和用于提高所产生的因子VIII分子的均质 性的用途，所述用途包括在培养基中，从用含有编码FVIII或者FVIII衍生物 的cDNA的DNA表达载体转化的CHO细胞中生产重组因子VIII，并使用与固相支 持体相连的因子VIII的特异性亲和分子来纯化所述因子VIII的方法，其包括：
a)在补充有所述硫酸葡聚糖的培养基中培养哺乳动物宿主细胞；
b)通过超滤浓缩所述含有因子VIII的培养基；和
c)通过免疫学的方法，从浓缩的培养基中纯化所述因子VIII，
其中所述因子VIII是名称为dBN(64-53)的单链因子VIII衍生物。
2.按照权利要求1的用途，其中在所述培养基中的所述硫酸葡聚糖的量 是10mg/L到2g/L。
3.按照权利要求1的用途，其中所述培养基是没有动物蛋白的培养基。
4.按照权利要求1的用途，其中所述免疫学的方法是免疫沉淀或者免疫 亲和色谱。
5.按照权利要求4的用途，其中所述色谱包含：
a)用含琼脂糖和琼脂糖凝胶的抗因子VIII特异性抗体偶联的固相支持体 填充的柱子；和
b)用于洗脱上述抗体偶联的固相支持体上的因子VIII分子的包含缓冲剂、 盐、洗涤剂和乙二醇的洗脱缓冲液。
6.按照权利要求5的用途，其中所述盐为氯化钙。
7.分子量是500kDa的硫酸葡聚糖用于保护名称为dBN(64-53)的单链因 子VIII衍生物不被在哺乳动物宿主细胞培养过程中所释放的蛋白酶切割和用于 提高所产生的因子VIII衍生物的均质性的用途。
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