[发明专利]利用HPLC在制备级上纯化RNA的方法

权利要求书

1.一种用于在制备级上纯化RNA的方法，其特征在于，利用多 孔反相作为固定相通过HPLC或低压或常压液相色谱法来纯 化所述RNA，其特征在于，所述多孔反相是多孔非烷基化聚 苯乙烯或多孔非烷基化聚苯乙烯二乙烯基苯，所述RNA的大 小为多至15000个核苷酸或碱基对，所述反相的孔径为至

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述RNA选自tRNA、 rRNA、mRNA或RNA变体，所述RNA变体为适体或核酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述RNA是全细胞RNA。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA的大小 为100至10000个核苷酸或碱基对。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多孔反相的颗 粒尺寸为8μm至50μm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多孔反相的颗 粒尺寸为8μm至30μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多孔反相的颗 粒尺寸为8μm至25μm。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反相的孔径为 至

9.根据权利要求1所述的方法，特征在于，所述多孔反相由珠粒 形成或作为聚合的块体而存在。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC柱的长度为 大于5cm、小于等于100cm，且直径为大于4mm、小于等于 25mm。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC柱的直径为 大于4mm、小于等于100cm。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC纯化以离子 对方法进行，其中将带有正电荷的离子加入流动相中作为带负 电荷的所述RNA的反荷离子，或通过尺寸排阻色谱法、凝胶 过滤、亲和色谱法或疏水作用色谱法来进行HPLC纯化。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，针对洗脱目的，使 用含水溶剂和有机溶剂的混合物来进行HPLC纯化。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述含水溶剂是 缓冲剂。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述缓冲剂是乙 酸三乙铵、三氟乙酸、乙酸、甲酸、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓 冲液、硫酸氢四丁铵、溴化四丁铵以及氯化四丁铵。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，乙酸三乙铵缓冲 剂是0.1M的乙酸三乙铵缓冲液。

17.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂是 乙腈、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丙酮或它们的混合物。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂是 乙腈。

19.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述流动相是0.1 M乙酸三乙铵和乙腈的混合物。

20.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述流动相包含 相对于所述流动相为5.0vol.%至25.0vol.%的有机溶剂，并与 所述含水溶剂构成100vol.%。

21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述流动相包含 相对于所述流动相为7.5vol.%至17.5vol.%的有机溶剂，并与 所述含水溶剂构成100vol.%。

22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，所述流动相包含 相对于所述流动相为9.5vol.%至14.4vol.%的有机溶剂，并与 所述含水溶剂构成100vol.%。

23.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行等度分离。

24.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行梯度分离。