[发明专利]用于刺激有粘附连接的细胞进行增殖的RNAi方法和组合物

说明书

政府支持

本发明，全部或部分地，得到国家眼科研究所(National Eye Institute)给 予Scheffer C.G.Tseng的基金号RO1 EY06819和基金号RO1 EY015735支 持。政府享有本发明的某些权利。

发明背景

角膜是眼睛最重要的折射元件，其是眼球中多层、透明、无血管的最 外层部分。人要想看得清楚，角膜所有的层都必须保持透明。在角膜某一 层上的任何模糊或不透明区域都会干扰光的正常折射。从眼表面向内，构 成角膜的连续层包括上皮层、鲍曼氏层(Bowman’s Layer)、间质层、后弹性 膜层(Descemet’s membrance)和内皮层。

人角膜内皮，是覆盖角膜的后表面并朝向前室的单层细胞，其在调控 角膜间质组织水合并由此透明的方面发挥关键的作用。人角膜内皮具有关 键的液体提取或泵出的功能，其是维持角膜透明所需要的。在健康的眼中， 眼液缓慢地从内部流向间质组织；过量的水通过角膜内皮从间质组织泵到 眼的前室。而且，关键的是液体流进和流出角膜的速率保持平衡。如果内 皮细胞的泵功能减弱，间质组织将膨大，并且间质组织的胶原基质的常规 样式将被过量的水破坏。这会导致间质组织变得浑浊，并最终不透明。

发明简述

本文描述了用于刺激具有粘附连接(Ajs，adherent junction)的细胞增殖 的方法，包括将细胞与下调至少一种细胞-细胞连接组分表达的试剂接触。 在一种实施方式中，所述细胞-细胞连接组分是AJ蛋白或p190。在另一实 施方式中，所述AJ蛋白是钙粘着蛋白。而在另一实施方式中，所述钙粘着 蛋白选自N-钙粘着蛋白、α-联蛋白、β-联蛋白、p120联蛋白(以下简称为 p120)、E-钙粘着蛋白、VE-钙粘着蛋白和P-钙粘着蛋白。

在一种实施方式中，具有AJs的细胞是，例如，内皮细胞、上皮细胞、 平滑肌细胞、角质形成细胞、外胚层细胞或内胚层细胞。在另一实施方式 中，内皮细胞是，例如，人角膜内皮细胞(以下简称HCECs；用在这里，HCECs 是角膜后表面处的单层细胞，其朝向前室)、管周内皮细胞、脑微血管内皮 细胞、血管内皮细胞、内皮祖细胞、阴道上皮细胞或任何其它类型的上皮 细胞。而在另一实施方式中，上皮细胞为，例如，视网膜色素上皮细胞、 肌上皮细胞、羊膜上皮细胞、尿道上皮细胞、乳腺上皮细胞、支气管上皮 细胞、卵巢上皮细胞、肺泡上皮细胞，或任何其它类型的内皮细胞。而在 又一种实施方式中，所述具有AJs的细胞为HCECs。

在一种实施方式中，所述试剂短暂地与所述内皮细胞接触。在另一实 施方式中，前述组分的下调由RNA干扰所致。而在另一实施方式中，所述 RNA干扰下调p120的表达。而在又一实施方式中，所述试剂为双链RNA。 而在又一实施方式中，所述RNA干扰以脉冲式使用。

在一种实施方式中，所述细胞与试剂在体内接触，如在哺乳动物体内， 例如，人、猴、狗、马、牛、绵羊、山羊、猪、狗、猫或兔。优选地，所 述哺乳动物为人。在另一实施方式中，所述接触发生在哺乳动物眼中。而 在另一实施方式中，所述哺乳动物的眼患有角膜内皮功能障碍，如，例如 大疱性角膜病变(包括无晶状体的或人工晶状体的大疱性角膜病变)、角膜内 皮细胞营养不良(包括富克斯角膜营养不良、角膜水肿、先天遗传性内皮营 养不良，或角膜内皮细胞受损的任意其它病症。而在又一实施方式中，所 述试剂被施用到哺乳动物眼的前室。而在又一实施方式中，所述试剂被施 用到眼的前室。

在一种实施方式中，所述细胞为HCECs，且所述试剂为下调N-钙粘着 蛋白、α-联蛋白、β-联蛋白、p120和/或p190表达的试剂。