[发明专利]使用离液剂的缓冲溶液去除核酸的分子分析干扰物

说明书

相关申请交叉参考案

本申请案主张2006年9月12日提出申请的标题为“使用离液剂的缓冲溶液去除核酸的分子分析干扰物(Removal Of Molecular Assay Interferences For Nucleic AcidsEmploying Buffered Solutions Of Chaotropes)”的美国临时申请案第60/825,379号的权利。本申请案还与托尼贝克(Tony Baker)于2001年8月16日提出申请的标题为“分子分析干扰物去除(Removal of Molecular Assay Interferences)”的美国专利申请案第09/932,122号有关，而第09/932,122号是2001年3月13日提出申请的同在申请中的申请案第09/805,785号的部分接续申请案，第09/805,785号是1998年11月3日提出申请的申请案第09/185,402号的接续申请案，第09/185,402号是1997年12月10日提出申请的申请案第08/988,029号的部分接续申请案。所有上述申请案的整体内容均以引用的方式并入本文中。

技术领域

本揭示内容关于当提交测试试样(例如，从活的个体获得的含核酸试样)供分子分析用或对其进行分子分析时用于去除其干扰物的组合物、方法和系统。

背景技术

实际上任何核酸序列的拷贝和克隆已通过聚合酶链反应(PCR)得到极大地促进，聚合酶链反应已变成分子生物学中的基本方法。在PCR的最简单形式中，其是酶催化合成特异性DNA序列的活体外方法。简言之，PCR可涉及在聚合酶和核苷酸的存在下在适当反应条件下使引物杂交至靶核酸或模板的变性链。然后聚合酶(通常为热稳定DNA聚合酶)识别杂交至模板的引物并处理与模板互补的引物延伸产物。然后可进一步视需要对所得模板和引物延伸产物实施若干轮后续变性、引物杂交和延伸以增加(或扩增)具有与靶核酸相同序列的核酸的量。销售商销售PCR试剂并公布PCR方案。PCR能够产生达10⁹倍的特异性DNA序列的选择性富集。所述方法阐述于(例如)美国专利第4,683,202号；第4,683,195号；第4,800,159号；和第4,965,188号、及萨凯(Saiki)等人，1985年，科学(Science)230：1350中，所有这些均以引用的方式并入本文中。

然而，可因许多不期望的副反应而危及扩增反应的最优效率。例如，许多PCR程序获得由引物和模板的引导错误所导致的非特异性副产物。引物彼此杂交也可使效率受损。当靶核酸以极低浓度存在时此问题尤其突出且可能使任何经扩增靶核酸变得模糊(即，可产生高背景)。

而且，业内的一个难题是掩蔽剂会干扰或抑制诸如PCR等分子分析。所述抑制剂包括白细胞酯酶、血红蛋白素(例如肌红蛋白和血红蛋白类似物)、氧化产物和分解产物(例如铁蛋白、高铁血红蛋白、硫血红蛋白和胆红素)，其影响分析的精确度，从而掩蔽试样中(例如)DNA的真实量或可检测量。也可想得到，例如欲分析的含遗传物质的人类试样掺加或掺杂有所述试剂可使得对试样所实施的分子分析较不可信或无结果。