[发明专利]使用离液剂的缓冲溶液去除核酸的分子分析干扰物

权利要求书

1、一种使第一核酸和第二核酸杂交的方法，所述方法包含：

(a)使以下物质接触：

(i)包含第一核酸和至少一种掩蔽剂的试样，所述掩蔽剂选自由白细胞酯酶、肌红蛋白类似物、血红蛋白类似物、肌红蛋白衍生物、血红蛋白衍生物、肌红蛋白氧化产物、血红蛋白氧化产物、肌红蛋白分解产物、血红蛋白分解产物、铁蛋白、高铁血红蛋白、硫血红蛋白、和胆红素组成的群组；与

(ii)阻抑组合物，其包含：

螯合剂，其选自由乙二胺四乙酸(EDTA)；咪唑；[亚乙基双(氧基亚乙基次氮基)]四乙酸(EGTA)；亚氨基二乙酸(IDA)；1，2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸(BAPTA)；双(5-脒基-2-苯并咪唑基)甲烷(BABIM)和其盐组成的群组；

螯合剂增强组份，其选自由氯化锂、水杨酸钠、高氯酸钠、硫氰酸钠、和其组合组成的群组；和

缓冲剂，

以形成杂交测试溶液；和

(b)使所述杂交测试溶液与第二核酸在允许所述第一核酸和第二核酸杂交的条件下接触，

其中所述螯合剂在所述杂交测试溶液中的浓度为约0.2M至约0.6M，

其中所述螯合剂增强组份在所述杂交测试溶液中的浓度为约O.1M至0.9M，

其中所述杂交测试溶液的pH为约4.5至约7.8，且

其中在存在所述阻抑组合物的情况下所述第一核酸和第二核酸之间的杂交程度大于在没有所述阻抑组合物的情况下所述第一核酸和第二核酸之间的杂交程度。

2、如权利要求1所述的方法，其中所述缓冲剂选自由以下组成的群组：乙酸钾、乙酸钠、磷酸钾、磷酸钠、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、(N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸)(HEPES)、MOPS缓冲剂(3-(N-吗啉基)丙烷磺酸)、ACES(2-[(2-氨基-2-氧代乙基)氨基]乙磺酸)缓冲剂、ADA(N-(2-乙酰胺基)2-亚氨基二乙酸)缓冲剂、AMPSO(3-[(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-丙烷磺酸)缓冲剂、BES(N，N-双(2-羟乙基)-2氨基乙磺酸)缓冲剂、比辛(Bicine)(N，N-双(2-羟乙基甘氨酸))缓冲剂、Bis-Tris(双-(2-羟乙基)亚氨基-三(羟甲基)甲烷)缓冲剂、CAPS(3-(环己基氨基)-1-丙烷磺酸)缓冲剂、CAPSO(3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙烷磺酸)缓冲剂、CHES(2-(N-环己基氨基)乙磺酸)缓冲剂、DIPSO(3-[N，N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基-丙烷磺酸)缓冲剂、HEPPS(N-(2-羟乙基哌嗪)-N′-(3-丙烷磺酸)缓冲剂、HEPPSO(N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-羟基丙烷磺酸))缓冲剂、MES(2-(N-吗啉基)乙磺酸)缓冲剂、三乙醇胺缓冲剂、咪唑缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙醇胺缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、MOPSO(3-(N-吗啉基)-2-羟基丙烷磺酸)缓冲剂、PIPES(哌嗪-N，N’-双(2-乙磺酸))缓冲剂、POPSO(哌嗪-N，N’-双(2-羟基丙磺酸))缓冲剂、TAPS(N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸)缓冲剂、TAPSO(3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基-丙烷磺酸)缓冲剂、TES(N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸)缓冲剂、曲辛(tricine)(N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲剂)、2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇缓冲剂、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲剂、和其组合。

3、如权利要求1所述的方法，其进一步包含使所述杂交测试溶液与至少一种选自由氯化锰、月桂酰基肌氨酸钠和十二烷基硫酸钠组成的群组的酶失活组份接触，所述酶失活组份在所述测试试样中处于至多约5％(w/v)的浓度范围内。

4、如权利要求1所述的方法，其中所述阻抑组合物进一步包含至少一种非离子型洗涤剂，其选自由以下组成的群组：聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇和壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(诺乃(Nonidet)洗涤剂)、辛基吡喃葡萄糖苷、十二烷基吡喃麦芽糖苷、庚基硫代吡喃葡萄糖苷、Big CHAP洗涤剂、吉呐普(Genapol)X-80、普流尼克(Pluronic)洗涤剂、烷基苯酚的聚氧乙烯酯(特里顿(Triton))、和其衍生物和类似物。