[发明专利]铜氧还蛋白衍生肽类的修饰物及其使用方法

说明书

相关申请的交叉参考

根据35U.S.C.§§119和120，此申请要求2006年9月11提交的美国临 时申请序列号60/843,388的权益，其要求2005年10月6日提交的美国专利 申请号11/244,105的优先权，其要求2004年10月7日提交的美国临时专利 申请号60/616,782、2005年5月13日提交的美国临时专利申请号60/680,500 及2005年7月19日提交的美国临时专利申请号60/700,297的优先权。这些 申请的全部内容在此完全引入作为参考。

政府投资的声明

此申请的主题已经受到National Institutes of Health(NTH).Bethesda， Maryland，U.S.A.，(补助金号ES 04050-18)的科研补助金的支持。政府在这一 发明中具有某些权益。

技术领域

本发明涉及具有药理学活性的修饰的铜氧还蛋白(cupredoxin)衍生肽类， 所述肽具有改进的药代动力学性质，以及使用其治疗患有与药理学活性有关 的多种病症的哺乳动物的方法。铜氧还蛋白衍生肽类的修饰包括氨基酸序列 变体和结构衍生作用，所述修饰可能增加肽的血浆半衰期、增加药理学活性 的比活、降低免疫原性和/或减少肽的生物转化。修饰的铜氧还蛋白衍生肽类 可以用于治疗哺乳动物的癌症、与不适当血管发生有关的病症、病毒和细菌 感染且特别是HIV和疟疾、与ephrin信号有关的病症的方法以及用于输送载 物化合物(cargo compound)(包括诊断化合物)至癌细胞的方法。

发明背景

来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的铜氧还蛋白天青蛋白是有 前途的新的治疗及诊断用分子。由铜绿假单胞菌产生的两种氧化还原蛋白质， 铜氧还蛋白天青蛋白和细胞色素(Cyt c551)，均进入J774细胞，同正常细胞相 比，显示了对于人癌细胞的显著的细胞毒性。Zaborina等人，Microbiology 146： 2521-2530(2000)。天青蛋白还可以进入人黑色素瘤UISO-Mel-2或人乳腺癌 MCF-7细胞。Yamada等人，PNAS 99：14098-14103(2002)；Punj等人，Oncogene 23：2367-2378(2004)；Yamada等人，Cell.Biol.7：14181431(2005)。此外，来 自铜绿假单胞菌的天青蛋白优先进入J774鼠类网状细胞肉瘤细胞，与肿瘤抑 制蛋白p53形成复合物并稳定肿瘤抑制蛋白p53，增强细胞内p53的浓度并诱 发细胞凋亡。Yamada等人，Infection and Immunity，70：7054-7062(2002)。同 非癌性细胞比较，天青蛋白还引起人骨肉瘤细胞中细胞凋亡的显著增加。Ye 等人，Ai Zheng 24：298-304(2003)。来自氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)的铁硫菌蓝蛋白(rusticyanin)也可以进入巨噬细胞并诱发细胞凋 亡。Yamada等人，Cell Cycle 3：1182-1187(2004)；Yamada等人，Cell.Micro. 7：1418-1431(2005)。来自层理席藻(Phormidium laminosum)的质体蓝素和来自 Achromobacter cycloclastes的假天青蛋白也是针对巨噬细胞的细胞毒素。美国 专利公布号20060040269，2006年2月23日公开。

天青蛋白目前还已知具有治疗意义的其他药理学活性。已知抑制人脐带 血管内皮细胞(HUVEC)中血管发生。美国专利申请号11/488,693，2006年7 月19日提交。也已知来自铜绿假单胞菌的天青蛋白具有抑制外周血液单个核 细胞中HIV-1感染的增加以及抑制感染疟疾的哺乳动物的红细胞的寄生虫血 症的能力。Chaudhari等人，Cell Cycle.5：1642-1648(2006)。也已知来自的铜 绿假单胞菌的天青蛋白可干扰多种哺乳动物细胞和组织中ephrin信号系统。 美国专利申请号11/436.592，2006年5月19提交的。