[发明专利]人T2R受体hT2R50的新单体型及其在鉴定人苦味调节剂的测定法中的用途

说明书

相关申请

[0001]本申请要求2006年9月5日提交的美国临时申请No.60/842,016的优先权。本申请还涉及现代理机构Senomyx公司于2001年3月5日提交的美国专利申请No.09/825,882。这两个专利申请文献均通过引用整体并入本文。这些申请涉及hT2R50苦味受体及其他人T2R味觉受体及它们在味觉调节分子的鉴定和潜在的治疗学中的用途。

技术领域

[0002]本发明涉及阐明特异性人味觉受体hT2R50(在本领域中也被称为hT2R45或hTas2R45)的新单体型，及阐明调节此新单体型的配体。

[0003]可基于此发现将此新单体型及其变体用于鉴定调节(优选阻断)与此hT2R50单体型相关的苦味的化合物的测定法，优选高通量的基于细胞的测定法。可将用这些测定法鉴定的化合物用作食品、饮料或药品中的添加剂以改善其味道。

[0004]本发明还涉及题述T2R基因及相应多肽及表达它们的细胞在治疗筛选(例如用于鉴定可用于调节胃肠功能(如食物感觉(foodsensing)，吸收，胃肠激素和肽分泌、转运和吸收的调控，对舌和胃肠系统中的毒素的响应，胃肠和代谢病症(如进食障碍(eating disorder)、糖尿病、肥胖症等的治疗)的化合物)中的用途。

背景技术

[0005]人可识别的基本味觉型之一是苦味。而时至近先仍对产生苦味的生理学原理知之甚少。最近的研究才开始揭示产生味觉的生物学原理(Lindemann，Nature(2001))。现已知许多苦味化合物通过与细胞表面受体相互作用而产生苦味。这些受体属于与胞内G蛋白相互作用的七种跨膜结构域受体家族。已在人和啮齿动物中鉴定出GPCR的新家族，称为T2R(Adler et al.，Cell 100(6)：693-702(2000)；Chandrashekar et al.，Cell 100(6)：703-711(2000)；Matsunami H，Montmayeur J P，Buck LB.Nature 404(6778)：601-4(2000))。本发明之前的几条证据提示T2R介导对苦味化合物的响应。首先，T2R基因在舌和腭上皮味觉受体细胞亚群中特异性表达。第二，人T2R之一(hT2R1)的基因位于与人对苦味化合物6-正丙基-2-硫尿嘧啶的敏感性连锁的染色体位点(Adler等人，(Id.)(2000))。第三，小鼠T2R之一(mT2R5)位于与小鼠对苦味化合物环己酰亚胺的敏感性连锁的染色体位点。还显示mT2R5可活化在味觉细胞中特异性表达并与苦味刺激转导关联的味转导素、G蛋白(Wong et al.，Nature 381：796-800(1996))。仅在响应环己酰亚胺时发生由mT2R5的味转导素活化(Chandrashekar等人，(Id.)(2000))。因此，有人已提出mT2R家族介导小鼠的苦味响应，而hT2R家族介导人的苦味响应。仅有一种人T2R被认为具有已鉴定的苦味配体-hT2R4，其显示被地那铵(denatonium)活化(Chandrashekar等人，(Id.)2000)。但所述研究中使用的有效地那铵浓度(1.5mM)异常高，即比已报道的地那铵对人的苦味阈值(Saroli，Naturwissenschaften 71：428-429(1984))高105倍。因此，没有特异性的苦味配体有说服力地匹配任何hT2R。也已提示每个hT2R能够结合多个苦味配体。此假设基于hT2R家族仅由25个已鉴定的成员组成，而人可将数百种不同的化合物识别为苦味的事实。Zuker等人(WO01/18050A2，(2001))和Adler等人(WO01/77676A1(2001))已于之前报道并在公开的PCT申请中公开了hT2R的序列，将两个文献均通过引用整体并入本文。

[0006]研究T2R功能的困难之一在于这些受体不易在培养的哺乳动物细胞系中表达。为改善T2R的表达，将来自良好表达的GPCR(视紫质)的N-末端序列连接到T2R序列(Chandrashekar等人，(Id.)2000)。还因有可利用的抗体，使此N-末端标签易监控蛋白表达。尽管所述视紫质标签的掺入改善了一些T2R在哺乳动物细胞系中的表达，但其中许多仍不能良好表达以满足功能研究。在不同的方法中，mT2R5在昆虫Sf9细胞中成功表达，并用于使用生化GTPγS结合测定法进行功能研究(Chandrashekar等人，(Id.)2000)。