[发明专利]人T2R受体hT2R50的新单体型及其在鉴定人苦味调节剂的测定法中的用途

权利要求书

1.编码苦味受体hT2R50单体型的核酸序列或其变体，所述核酸序列编码具有SEQ ID NO：3所含序列的T2R多肽序列，所述变体编码与所述T2R多肽序列具有至少90％序列同一性且在其羧基末端含与SEQID NO：3所含hT2R50多肽相同的10个氨基酸的T2R多肽。

2.核酸序列，其编码SEQ ID NO：3所含多肽。

3.权利要求2的核酸序列，其包含SEQ ID NO：2所含核酸序列。

4.表达载体，其含权利要求1的核酸序列。

5.表达载体，其含权利要求2的核酸序列。

6.表达载体，其含权利要求3的核酸序列。

7.细胞，含权利要求1中任一项的表达载体。

8.权利要求7的细胞，其选自哺乳动物细胞、细菌细胞、酵母细胞和两栖动物卵母细胞。

9.权利要求8的哺乳动物细胞，其选自HEK-293细胞、HEK-293T细胞、CHO细胞、Cos细胞和BHK细胞。

10.权利要求9的哺乳动物细胞，其是HEK-293细胞。

11.权利要求8的细胞，其还表达与所述hT2R多肽功能相关的G蛋白。

12.权利要求11的细胞，其中所述G蛋白选自Gα16、Gα16、味转导素、转导蛋白或包含其部分的嵌合G蛋白。

13.包含hT2R50单体型的多肽或其变体，所述多肽具有SEQ IDNO：3所含多肽序列，所述变体与所述多肽具有至少90％序列同一性且特异性响应2-乙酰吡嗪或乙基吡嗪。

14.权利要求13的多肽，其包含SEQ ID NO：3所含序列。

15.测定法，其用于鉴定调节特异性响应2-乙酰吡嗪或乙基吡嗪的人hT2R50苦味受体的化合物，所述受体选自SEQ ID NO：3所含hT2R50单体型多肽、或与所述hT2R50单体型具有相同的氨基酸序列但缺乏最后10个羧基氨基酸的hT2R50多肽、或与所述序列具有至少90％序列同一性且特异性响应2-乙酰吡嗪或乙基吡嗪的hT2R50多肽变体，所述测定法包括：

i.筛选作用于2-乙酰吡嗪或乙基吡嗪或在结构上相关并诱导所述hT2R多肽的活化的化合物，和

ii.确定所述化合物是否基于其对所述受体被所述吡嗪或结构上相关的化合物活化的作用而调节hT2R50相关的苦味。

16.权利要求15的测定法，其中所述hT2R50味觉受体在分离的细胞膜中表达。

17.权利要求15的测定法，其中所述hT2R50味觉受体在完整的细胞中表达。

18.权利要求15的测定法，其中所述hT2R50味觉受体在真核细胞中表达。

19.权利要求15的测定法，其中所述hT2R50味觉受体由两栖动物、哺乳动物或昆虫细胞表达。

20.权利要求15的测定法，其中所述味觉受体在选自HEK293、BHK、COS、HEK293T、CHO和爪蟾卵母细胞的细胞中表达。

21.权利要求15的测定法，其是荧光测定法。

22.权利要求15的测定法，其是结合测定法。

23.权利要求15的测定法，其通过测定所述化合物对胞内离子浓度的作用来检测对所述化合物的作用。

24.权利要求23的测定法，其检测所述化合物对胞内钠或钙的作用。

25.权利要求15的测定法，其检测所述化合物对细胞膜电位的作用。

26.权利要求15的测定法，其检测所述化合物对所述味觉受体转录的作用。

27.权利要求15的测定法，其中所述化合物是根据其阻断所述吡嗪化合物对所述hT2R50味觉受体的活化或与其相互作用的能力筛选的。

28.权利要求15的测定法，其检测所述化合物对胞内cAMP、cGMP或IP3的作用。