[发明专利]针对VEGF的ELISA

权利要求书

1.一种用于在生物学样品中选择性检测大于110个氨基酸的血管内皮生长因子(VEGF)形式(VEGF₁₁₀₊)的方法，所述形式包括VEGF₁₂₁，该方法包括如下步骤：

(a)使生物学样品与固定化至固体支持物的捕捉试剂接触并一起温育，其中所述捕捉试剂包含识别与由保藏号为PTA-7737的杂交瘤5C3.1.1获得或生成的抗体5C3识别的表位相同的表位的单克隆抗体；

(b)将所述生物学样品与所述固定化捕捉试剂分开；

(c)使所述固定化捕捉试剂-靶物分子复合物与可检测抗体接触，所述可检测抗体能结合VEGF的KDR和/或FLT1受体结合结构域或能结合VEGF1-110中的表位；并

(d)使用针对所述可检测抗体的检测手段来测量所述捕捉试剂所结合的VEGF₁₁₀₊的水平。

2.权利要求1的方法，其中所述生物学样品是从人受试者中分离的。

3.权利要求2的方法，其中所述人受试者具有血管病症、糖尿病、或癌症，且所述测量步骤(d)还包括与标准曲线进行比较以测定与正常个体相比的VEGF水平。

4.权利要求1的方法，其中所述生物学样品是肿瘤溶胞产物、血浆、血清或尿。

5.权利要求1的方法，其中所述固定化捕捉试剂包被在微量滴定板上。

6.权利要求1的方法，其中所述可检测抗体是可直接检测的。

7.权利要求6的方法，其中所述可检测抗体受荧光测定试剂放大。

8.权利要求7的方法，其中所述可检测抗体是生物素化的，且所述检测手段是亲合素或链霉亲合素-过氧化物酶和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺。

9.权利要求1的方法，其中所述可检测抗体是单克隆抗体。

10.权利要求9的方法，其中所述可检测抗体是鼠单克隆抗体。

11.权利要求10的方法，其中所述固定化单克隆抗体是单抗5C3，且所述可检测抗体是单抗A4.6.1。

12.一种用于在生物学样品中选择性检测VEGF₁₁₀₊形式的免疫测定试剂盒，所述形式包括VEGF₁₂₁，该试剂盒包含：

(a)作为捕捉试剂的针对人VEGF的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体识别与由保藏号为PTA-7737的杂交瘤5C3.1.1获得或生成的抗体5C3识别的表位相同的表位；和

(b)作为检测试剂的可检测抗体，其能结合VEGF的KDR和/或FLT1受体结合结构域或能结合VEGF1-110中的表位。

13.权利要求12的试剂盒，其还包含所述捕捉试剂的固体支持物。

14.权利要求13的试剂盒，其中所述捕捉试剂固定化在所述固体支持物上。

15.权利要求14的试剂盒，其中所述捕捉试剂包被在微量滴定板上。

16.权利要求15的试剂盒，其还包含所述可检测抗体的检测手段。

17.权利要求16的试剂盒，其中所述检测手段是比色法的。

18.权利要求12的试剂盒，其还包含作为抗原标准品的纯化的VEGF。

19.一种抗体5C3，其由保藏号为PTA-7737的杂交瘤5C3.1.1获得或生成。

20.权利要求19的抗体，其偶联有可检测标记物。

21.一种杂交瘤5C3.1.1，其保藏于ATCC且保藏号为PTA-7737。

22.权利要求1的方法，其中所述方法进一步选择性检测形式VEGF₁₆₅₊。

23.权利要求12的免疫测定试剂盒，其中所述免疫测定试剂盒进一步选择性检测形式VEGF₁₆₅₊。