[发明专利]提高具有生物学活性之多肽的分泌的方法

权利要求书

1.用于产生具有生物学活性的分泌型多肽的方法，该方法包括：

(a)用编码融合蛋白的融合蛋白构建体转化真菌宿主细胞，其中所述融 合蛋白的序列为SEQ ID NO：74或SEQ ID NO：76；

(b)在适于所述融合蛋白产生的条件下培养所述经过转化的真菌宿主细 胞；和

(c)自所述培养基回收融合蛋白，其中所述融合蛋白具有生物学活性。

2.权利要求1的方法，其中所述融合蛋白构建体进一步包含启动子和/ 或终止子。

3.权利要求1的方法，其中SEQ ID NO：74由SEQ ID NO：73编码，而SEQ  ID NO：76由SEQ ID NO：75编码。

4.一种分离的融合蛋白，其序列为SEQ ID NO：74或SEQ ID NO：76。

5.权利要求4的融合蛋白，其中SEQ ID NO：74由SEQ ID NO：73编码， 而SEQ ID NO：76由SEQ ID NO：75编码。

6.一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码权利要求4或5的融合蛋白。

7.一种融合蛋白构建体，该融合蛋白构建体包含权利要求6的多核苷酸。

8.一种表达载体，该表达载体包含权利要求7的融合蛋白构建体。

9.一种真菌宿主细胞，该真菌宿主细胞经过权利要求7的融合蛋白构建 体的转化。

10.一种用于降解或转变含纤维素材料的方法，该方法包括：在存在有 效量的权利要求4或5的融合蛋白的条件下用有效量的纤维素分解酶组合物 处理所述含纤维素材料。

11.权利要求10的方法，其中所述纤维素分解酶组合物包含一种或几种 选自下组的蛋白质：纤维素酶和具有纤维素水解增强活性的多肽。

12.权利要求11的方法，其中所述纤维素酶选自内切葡聚糖酶和纤维二 糖水解酶。

13.权利要求10的方法，该方法进一步包括用有效量的一种或几种选自 下组的酶处理所述含纤维素材料：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶、过氧 化物酶、或其混合物。

14.权利要求10的方法，其中所述方法是预处理方法、同步糖化和发酵 方法(SSF)中的步骤、分别水解和发酵(SHF)中的步骤、或混合水解和发酵方 法(HHF)中的步骤。

15.权利要求10-14任一项的方法，该方法进一步包括回收经过降解的含 纤维素材料。

16.权利要求10的方法，其中所述纤维素分解酶组合物和/或融合蛋白为 含有或不含细胞的发酵液的形式。

17.一种用于产生发酵产品的方法，该方法包括：

(a)在存在有效量的权利要求4或5的融合蛋白的条件下用有效量的纤维 素分解酶组合物糖化含纤维素材料；

(b)用一种或几种发酵微生物将步骤(a)的经糖化的含纤维素材料发酵；和

(c)从所述发酵回收所述发酵产品。

18.权利要求17的方法，其中所述纤维素分解酶组合物包含一种或几种 选自下组的蛋白质：纤维素酶和具有纤维素水解增强活性的多肽。

19.权利要求18的方法，其中所述的纤维素酶选自内切葡聚糖酶和纤维 二糖水解酶。

20.权利要求17的方法，该方法进一步包括用有效量的一种或几种选自 下组的酶处理所述含纤维素材料：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶、过氧 化物酶、或其混合物。

21.权利要求17的方法，其中步骤(a)和(b)是在同步糖化和发酵中同时进 行的。

22.权利要求17的方法，其中所述发酵产品是醇、有机酸、酮、氨基酸、 或气体。

23.权利要求17-22任一项的方法，其中所述纤维素分解酶组合物和/或 所述融合蛋白为含有或不含细胞的发酵液的形式。