[发明专利]基于IP-10的免疫学监测

说明书

技术领域

本发明主要涉及一种免疫学分析，并且特别涉及一种用于测量细胞介导免 疫(cell-mediated immune，CMI)反应性的分析。更具体地说，本发明提供了 一种使用全血或其它合适的生物样品来测量细胞介导对抗原的应答的分析和 试剂盒。这种分析在对人类、牲畜的治疗和诊断方案以及兽医学和野生动物应 用上是有利的。

对细胞介导免疫应答的测量对多种传染性疾病和自身免疫疾病的免疫诊 断是很重要的，这种对细胞介导免疫应答的测量作为对免疫活性的标记，并用 作对T细胞对内源抗原和外源抗原(即，感染和疫苗)的应答进行的检测。

本发明提供了一种通过孵育来自哺乳动物的样品来测量哺乳动物内的 CMI的方法，所述哺乳动物的样品含有具有抗原的T细胞或者其它免疫系统 细胞。随后检测到干扰素诱导蛋白10(IP-10)的产生。这种免疫效应物的存 在或水平进而表示了细胞介导对物体的应答度水平。

背景技术

肺结核

结核分枝杆菌(MTB)特异性免疫显性抗原的发现引领了用于肺结核(TB) 诊断的新途径。早期的工作已显示出通过对测定的MTB抗原做出应答的T-细 胞来测定体外干扰素γ(IFN-γ)的产生的试验来代替结核菌素皮肤试验的潜能。 与此同时，一个重大的进步就是发现了显著地提高了特异性的高度免疫原性抗 原、早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)以及培养滤液蛋白10(CFP-10)和的发 现结核菌7.7(TB7.7)。这些抗原在病原体的差异区1(RD1)内进行编码， 因此不存在在卡介苗(BCG)疫苗株和大部分的非结核分枝杆菌中(例外的情 况包括堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、苏加分枝杆菌(Mycobacterium szulgai))。对RD1编码的抗原 ESAT-6、CFP-10、TB7.7的重叠的肽的IFN-γ应答形成了在两种获得许可并且 商业可利用的试验中对MTB感染进行检测的基础。

一种全血酶联免疫测定(ELISA)-康提伏朗-结核金(QuantiFERON-TB Gold)(塞勒斯提有限公司，卡内基，维多利亚，澳大利亚(Cellestis Limited， Carnegie，Victoria，Australia))具有欧洲CE标志认证，并且最近得到了美国 食品与药品管理局(FDA)的用于检测潜伏的TB感染和疾病的认证。

一种使用外周血单个核细胞的酶联免疫斑点测定(ELISPOT)——结核感 染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)(牛津免疫科技，牛津，英国(Oxford Immunotec，Oxford，UK)具有欧洲CE认证并且在2005年得到在加拿大使 用的许可。T-SPOT.TB仅使用ESAT-6和CFP10。

然而，目前可用的试验存在以下限制：

1)可能削弱在免疫抑制个体中的灵敏度(例如，人体免疫缺陷病毒(HIV) 阳性或者接受免疫抑制药物治疗的患者)，

2)在某些情况下需要相对大量的血液(3ml每QuantiFERON试验以及8 ml用于T-SPOT.TB)，这可能限制了其对婴儿和重病以及贫血儿童的使用，

3)这些试验没有区别对待活动性感染、潜伏性感染以及近期感染(recent infection)

4)没有证实这些试验能够预言谁将从新近TB或潜伏性TB发展为活动性 TB。

大多的试验限制是由于测量非常低水平的效应参数IFN-γ，这种低水平甚 至接近最敏感的方法的极限(在QuantiFERON试验中低至0.35IU/ml (17.5pg/ml)并在T-SPOT.TB中为5点/单位面积(spots/field))。为了增强灵 敏度而减少截止点(cut-off)将最终导致损害试验的特异性。目前基于 QuantiFERON测试的出版物表示了对人们进行的具有较低范围的IFN-γ的试验 结果的重复试验在截止点水平附近有不同，这强调了QuantiFERON(QFT) 测试的假阳性和假阴性结果的潜在风险(拜，M等人(Pai，M.et al))。