[发明专利]用胚胎干细胞制备转基因禽类的方法

权利要求书

1.一种培养禽类胚胎干细胞的方法，该方法包含下列步骤：

a)将起源于受精未孵育的禽卵胚盘的胚胎干细胞用添加下列成分 的基础培养基悬浮：

-胰岛素样生长因子1和纤毛神经营养因子；

-动物血清；和

-至少一种选自由白细胞介素6、白细胞介素6受体、干细胞因子、 成纤维细胞生长因子、白细胞介素11、制瘤素和心营养素组成的组的 其他生长因子；

b)将步骤a)获得的胚胎干细胞悬浮液接种于饲养细胞层上并继 续培养胚胎干细胞，使其传2至10代；

c)将在步骤a)中加入的除胰岛素样生长因子1和纤毛神经营养 因子外的任何生长因子从培养基中去除；和

d)用步骤c)的培养基在饲养细胞层上继续培养胚胎干细胞。

2.一种培养禽类胚胎干细胞的方法，该方法包含下列步骤：

a)将起源于受精未孵育的禽卵胚盘的胚胎干细胞用添加下列成分 的基础培养基悬浮：

-胰岛素样生长因子1、纤毛神经营养因子、白细胞介素6、白细胞 介素6受体、干细胞因子、成纤维细胞生长因子和动物血清；

b)将步骤a)获得的胚胎干细胞悬浮液接种于饲养细胞层上并继 续培养胚胎干细胞，使其传2至10代；

c)将干细胞因子、成纤维细胞生长因子、白细胞介素6和白细胞 介素6受体从培养基中去除；

d)用步骤c)的培养基在饲养细胞层上继续培养胚胎干细胞。

3.根据权利要求1到2任一项所述的方法，其中禽类胚胎干细胞 是鸡胚胎干细胞。

4.根据权利要求1到2任一项所述的方法，其中禽类胚胎干细胞 是鸭胚胎干细胞。

5.一种将禽类胚胎干细胞进行遗传修饰的方法，该方法包含下列 步骤：

a)用载体转染根据权利要求1-2任一项所述方法培养的胚胎干细 胞；

b)选择已转染的胚胎干细胞；

c)筛选和扩增选定的遗传修饰的胚胎干细胞克隆；

d)在包含动物血清、胰岛素样生长因子1和纤毛神经营养因子的 培养基中在饲养细胞层上培养所述遗传修饰的胚胎干细胞。