[发明专利]具有促胰岛素活性的生物活性多肽的制备方法有效
申请号: | 200780029612.1 | 申请日: | 2007-06-20 |
公开(公告)号: | CN101501209A | 公开(公告)日: | 2009-08-05 |
发明(设计)人: | 华马奇斯南·米拿高德;亚昆迪·温卡达·斯理南;奇特拿·南祖迪·沙士查利;拉斯米·巴哈·华拉特拉查鲁;斯利古马·素因拿拉因 | 申请(专利权)人: | 百奥勤有限公司 |
主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02;A61K38/16 |
代理公司: | 北京三友知识产权代理有限公司 | 代理人: | 黄 健 |
地址: | 印度卡*** | 国省代码: | 印度;IN |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 具有 胰岛素 活性 生物 多肽 制备 方法 | ||
1.一种制备具有N-末端识别位点His-Gly的生物活性Exendin-4的方 法,所述Exendin-4具有促胰岛素活性,所述方法包括下列步骤:
a)以编码Exendin-4前体的多核苷酸载体转化经遗传修饰的毕赤酵母, 所述Exendin-4前体为具有C-末端甘氨酸的Exendin-4,所述毕赤酵母的蛋 白酶基因STE13已被敲除;
b)培养所述转化的毕赤酵母以生产Exendin-4前体;和
c)分离并α-酰胺化所述Exendin-4前体以生产所述生物活性 Exendin-4。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述Exendin-4前体是与C-末端α- 酰胺化酶接触从而产生α-酰胺化的生物活性Exendin-4。
3.如权利要求2所述的方法,其中所述α-酰胺化的Exendin-4如SEQ ID NO.2所示:
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2。
4.一种制备具有N-末端识别位点His-Gly的Exendin-4前体的方法, 所述Exendin-4前体为具有C-末端甘氨酸的Exendin-4,该Exendin-4前体 具有促胰岛素活性,所述方法包括下列步骤:
a.以编码所述Exendin-4前体的多核苷酸载体转化经遗传修饰的毕赤 酵母,所述毕赤酵母的蛋白酶基因STE13已被敲除;和
b.培养所述转化的毕赤酵母以生产所述Exendin-4前体。
5.如权利要求1或4所述的方法,其中所述Exendin-4前体的氨基酸 序列如SEQ ID NO.4所示。
6.如权利要求5所述的方法,其中编码所述Exendin-4前体的多核苷 酸序列如SEQ ID NO.5所示。
7.如权利要求1或4所述的方法,其中所述蛋白酶基因STE13为N- 末端二肽酰肽酶基因。
8.如权利要求1或4所述的方法,其中所述转化的毕赤酵母在诱导 Exendin-4前体表达的条件下培养。
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