[发明专利]在油包水乳液中的微粒上的单分子PCR

权利要求书

1.一种用于分析核苷酸序列变异的方法，包括：

形成微乳液，其包括油相和水相，其中所述水相包括一种或多种分析物DNA分子，其中所述水相占所述微乳液的10-30％(v/v)以及所述油相占所述微乳液的70-90％(v/v)；其中所述油相包括：数量为所述油相的60-85％(v/v)的一种或多种低粘度烃，其具有在25℃下为20mPas以下的粘度；数量为10-30％(v/v)的一种或多种高粘度烃，其具有在25℃下大于20mPas的粘度；以及数量为5-10％(v/v)的乳化剂；

在试剂珠存在下扩增所述微乳液中的分析物DNA分子，其中所述试剂珠与用于扩增所述分析物DNA分子的引物的多个分子结合，由此形成与一种分析物DNA分子的多个拷贝结合的产物珠；

分离所述产物珠与未结合于所述产物珠的分析物DNA分子；

测定与所述产物珠结合的所述一种分析物DNA分子的序列特征。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述微乳液用数量为所述油相的15-25％(v/v)的高粘度烃形成。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述微乳液用数量为所述油相的17-23％(v/v)的高粘度烃形成。

4.如权利要求1所述的方法，其中多个分离的微乳液群利用组织搅拌磨粉碎机和每孔中的金属球在多孔板中同时形成。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述低粘度烃包括选自下述的氧部分：羟基、酯、醚和羧酸。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述高粘度烃在25℃具有20-30mPas的粘度。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述高粘度烃在25℃具有20-25mPas的粘度。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述高粘度烃在25℃具有22-26mPas的粘度。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述低粘度烃选自：4-甘油异硬脂酸酯、乙二醇、丙二醇、十六烷基丙二醇、月桂酸己酯、碳酸二乙基己酯以及它们的混合物。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述低粘度烃在25℃时具有15mPas以下的粘度。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述低粘度烃在25℃时具有10mPas以下的粘度。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述低粘度烃在25℃时具有5mPas以下的粘度。

13.液体组合物，其包括多个形成含水区室的微乳液，其中所述含水区室的至少一部分包括：

珠子；

多核苷酸模板；和

用于扩增所述模板的寡核苷酸引物；

其中所述寡核苷酸引物的至少一部分与所述珠子结合，其中所述微乳液包括油相和水相，其中所述水相占所述微乳液的10-30％(v/v)以及所述油相占所述微乳液的70-90％(v/v)；其中所述油相包括：数量为所述油相的60-85％(v/v)的一种或多种低粘度烃，其具有在25℃下为20mPas以下的粘度；数量为10-30％(v/v)的一种或多种高粘度烃，其具有在25℃下20mPas以上的粘度；以及数量为5-10％(v/v)的乳化剂。

14.如权利要求13所述的液体组合物，其中所述微乳液包括数量为所述油相的15-25％(v/v)的高粘度烃。

15.如权利要求13所述的液体组合物，其中所述微乳液包括数量为所述油相的17-23％(v/v)的高粘度烃。

16.如权利要求13所述的液体合成物，其中多个分离的微乳液群利用组织搅拌磨粉碎机和每孔中的金属球在多孔板中同时形成。

17.如权利要求13所述的液体组合物，其中所述低粘度烃包括选自下述的氧部分：羟基、酯、醚和羧酸。

18.如权利要求13所述的液体组合物，其中所述高粘度烃在25℃具有20-30mPas的粘度。

19.如权利要求13所述的液体组合物，其中所述高粘度烃在25℃具有20-25mPas的粘度。

20.如权利要求13所述的液体组合物，其中所述高粘度烃在25℃具有22-26mPas的粘度。