[发明专利]质谱法生物标记测定

权利要求书

1.确定样品中一种或多种多肽生物标记存在的方法，所述方法包 括以下步骤：

(a)使样品进行质谱(MS)分析并且记录每个检测信号的保留时 间指数和相应质量；

(b)使相应于每个信号的质量与生物标记质量的参考数据库相关 联，以形成每个信号和参考生物标记之间的相关性，并抛弃那些质量 不与参考生物标记质量相关的信号；

(c)储存那些质量与参考生物标记相关的信号；

(d)通过利用相似性度量将每个信号的MS光谱与数据库中参考 生物标记的MS光谱匹配，确定每个储存信号和参考生物标记之间的 相关性，以界定一组阳性相关信号；

(d)测量每个阳性相关信号的强度，并利用辨别函数对它的绝对 信号强度或相对信号强度记分；

(e)将阈值应用于获自辨别函数的得分值，以确定生物标记的存 在或不存在。

2.权利要求1的方法，其中使测试样品在没有预先的分离操作的 情况下进行MS分析。

3.权利要求2的方法，其中通过利用静电纳米电雾化原理的直接 输注、流动注射分析或样品富集流动注射分析测试样品。

4.权利要求1的方法，其中测试样品在MS分析之前被处理。

5.权利要求4的方法，其中所述样品处理包括通过单相或多相高 压液相色谱法(HPLC)的样品分离。

6.前述任一项权利要求的方法，其中MS是电雾化离子化(ESI) MS、基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)MS或表面增 强激光解吸电离-飞行时间(SELDI-TOF)MS。

7.前述任一项权利要求的方法，其中用于多种生物标记的参考质 量和MS光谱数据以电子形式或纸件形式储存。

8.前述任一项权利要求的方法，其中用于给定的生物标记的参考 MS光谱是通过聚类计算而由实际和测量数据获得的平均光谱。

9.前述任一项权利要求的方法，其中参考肽的一种或多种内标在 MS分析之前加入到样品中。

10.权利要求9的方法，其中内标用分子标签标记。

11.权利要求9的方法，其中内标被标记并包括在主数据组中。

12.权利要求11的方法，其中绝对信号强度通过测量生物标记信 号强度并将其与一种或多种已知内标比较而记分。

13.权利要求1-9任一项的方法，其中在没有添加内标的情况下 处理样品。

14.权利要求13的方法，其中通过测量患者中个体生物标记信号 强度和患者组的参考信号强度之间的比例而对相对信号强度记分。

15.权利要求13的方法，其是完全自动化的。

16.权利要求1的方法，其中计算来自MS信号强度的得分的辨别 函数任选包括利用任何临床变量，例如临床检查结果和/或临床观察的 表型和/或医疗记录。

17.确定疾病的存在的诊断方法，所述方法包括比较测试样品的蛋 白序列生物标记与参考生物标记，其中参考生物标记包括表1中鉴定 的肽。