[发明专利]CRAC调节剂及其在药物发现中的用途

说明书

相关申请交叉引用

本申请根据35U S C§119(e)要求获得2006年4月10日提交的临时专 利申请60/791,038的权益，本文引用其内容作为参考。

关于政府资助研究或开发的申明

本工作部分地获得NIH资助5-R37-GM053950(JPK)，R01-AI050200和 R01-NS04Q927(RP)，R01-GM065360(AF)的支持。

发明背景

受体介导的信号传递在不可兴奋性细胞(non-excitable cell)中，特别是在 免疫细胞中，参与细胞内Ca²⁺由于从细胞内钙池释放而初升(initial rise)。由 此导致细胞内钙池耗尽，从而诱导Ca²⁺通过钙释放激活的钙(CRAC)通道穿 过细胞质膜而内流(J W Putney，Jr，Cell Calcium 11 611(1990年11月-12月) M Hoth，R Penner Nature 355，353(1992年1月23日)，A B Parekh，R Penner， Physiol Rev 77 901(1997))。这种现象对基因转录、增殖和细胞因子释放等 许多生理过程是十分重要的(A B Parekh，R Penner，Physiol Rev 77，901 (1997)，M Partiseti et al，J Biol Chem 269，32327(Dec 23，1994)，R S Lewis Annu Rev Immunol 19，497(2001))。在生物物理上，CRAC电流已经获得良 好的表征(M Hoth，R Penner，Nature 355，353(1992年1月23日)，M Hoth，R Penner，J Physiol(Lond)465，359(1993)，A Zweifach，R S Lewis，Proc Natl Acad Sci U S A 90，6295(1993))，但是CRAC通道自身以及导致其激活的通 路仍然不为人所知。最近，两个研究组独立地鉴定STIM1是钙池操纵的钙 内流(store-operated calcium entry)的一个基本组元(J Liou等人，Curr Biol 15 1235(2005年7月12日)；J Roos等人，J CeIl Biol 169 435(2005年5月9日))。 这种蛋白质定位于细胞内室，有可能是ER的部分。它具有一个含腔内 (luminal)EF手基序的单跨膜域，该基序似乎对于其假定的腔内Ca²⁺水平ER 传感器的功能是至关重要的。一旦钙池耗尽，STIM1重新分布到移动并积 累在细胞质膜下方的独特结构(点(punctae))内。关于STIMI实际上是否整合 到细胞质膜内尚有争议(J Liou等人，Curr Biol 15，1235(2005年7月12日)，S L Zhang等人，Nature 437，902(2005年10月6日)1M A Spassova等人，Proc Natl Acad Sci USA 103，4040(2006年3月14日))。STIM1是激发CRAC电 流必需的，然而其存在或者甚至其转位是不够的，因为来自SCID患者的淋 巴细胞具有正常的STIM1水平，但仍然不能激活CRAC通道(S Feske等人， J Exp Med 202，651(2005年9月5日))。这提示有其他的分子组分参与钙池 操纵的Ca²⁺内流机制。

发明概要

本发明涉及钙释放激活的Ca²⁺(CRAC)通道调节剂(CRACM)例如 CRACM1和CRACM2的用途。本发明进一步涉及编码CRACM的重组核 酸的用途。本发明的一个方面包括用于确定候选生物活性剂是否能够调节 CRACM多肽的离子通道活性的方法。本发明还包括用于筛选能够在 CRACM多肽影响CRAC通道通透性时调节CRACM多肽活性的试剂的方 法。本发明进一步涉及调节编码CRACM的核酸的细胞表达的方法和组合 物。