[发明专利]通过对薄切肿瘤组织中mRNA表达进行定量测试实体瘤中药物敏感性的方法

权利要求书

1.一种确定治疗药物是否针对实体瘤可能有效的方法，其包括：

从所述实体瘤获得第一样品和第二样品，其中所述第一样品和第二样品含 有厚度为20微米至500微米基本均一的切片；

在体外将所述第一样品与所述药物孵育；

在体外将所述第二样品与对照刺激物孵育；

在孵育之后，检测所述第一样品和第二样品中与肿瘤细胞凋亡相关的 mRNA的量；以及

将所述第一样品和第二样品中所述mRNA的量进行比较，其中如果所述 量之间的差别超过大约50％，则所述治疗可能有效。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基本均一的切片具有在大约 50微米至200微米范围内的厚度。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一样品和第二样品各自含 有至少三个均一的切片。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述与肿瘤细胞的凋亡相关的 mRNA是通过包括下列的方法鉴定的：

从所述实体瘤获得第三样品和第四样品；

在体外，将所述第三样品暴露于促细胞凋亡刺激；

将所述第三样品和第四样品孵育足以在细胞样品中产生凋亡变化的时间 期间；

检测所述第三样品和第四样品中选自由p21、GADD、Apaf-1、SUMO、 Bfl-1、BCL-W、BCL-2、PUMA、NOXA、Hrk、Bim、BINP3、Bik、Bid、Bad、 Bcl-XS、Bok、Bak、Bax、LRP和MRP所组成组中的至少一种mRNA的量； 以及

确定所述第三样品中mRNA的量与所述第四样品中mRNA的量的比值， 其中，表现出1.5或更高比值的mRNA被鉴定为凋亡标记物mRNA。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第三样品和第四样品含有基 本均一的实体瘤切片。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一样品和第二样品是通过 包括下列步骤的方法获得的：

从实体瘤取出基本均一的部分病灶；

将所述部分病灶包埋在与所述部分病灶具有几乎相同硬度并且不会降低 所述部分病灶内细胞生存能力的材料中；

将所包埋部分病灶的温度降低到大约4℃；以及

对所包埋的部分病灶进行切片。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述均一的部分病灶大致是立方 体的。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述立方体均一的部分病灶被检 测为大约1mm×1mm×1mm。

9.根据权利要求6所述的方法，其中，所述材料含有可进入细胞的营养 物和氧。

10.根据权利要求6所述的方法，其中，所述材料是凝胶。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述凝胶是通过施加刺激从液 体制备的。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述刺激选自由化学药物、紫 外线和电流所组成的组中。

13.根据权利要求6所述的方法，其中，所述包埋步骤包括：

将基本均一的部分病灶浸入到液体中；以及

通过施加刺激将所述液体转变为凝胶。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述对照刺激物选自由PBS和 DMSO所组成的组中。

15.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一样品和第二样品被孵育 在CO₂孵育器中。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一样品和第二样品被孵育 3小时至5小时。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述第一样品和第二样品被孵 育大约4小时。