[发明专利]假性感染性黄病毒及其用途

权利要求书

1.黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其包含：

在编码衣壳(C)蛋白的核苷酸序列中的缺失，其中所述缺失编 码所述C蛋白的氨基酸26到100或所述C蛋白的氨基酸26到93或 31到100，并且所述缺失不破坏基因组环化所需要的RNA序列或 prM/M的正确成熟所需要的prM蛋白的信号序列。

2.权利要求1的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中所述 病毒是黄病毒、肝病毒或瘟病毒，或通过将其它病毒的prM-E盒与假 性感染性病毒的prM-E盒交换而产生的所述病毒的其它嵌合体。

3.权利要求2的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中所述 黄病毒是黄热病病毒、西尼罗河病毒、登革热病毒、蜱传脑炎病毒、 圣路易脑炎病毒、日本脑炎病毒或墨累谷脑炎病毒。

4.权利要求3的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中缺失 的编码所述黄病毒的C蛋白的核苷酸序列编码氨基酸26到100。

5.权利要求2的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中所述 肝病毒是丙型肝炎病毒。

6.权利要求2的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中所述 瘟病毒是牛病毒性腹泻病毒、猪瘟病毒或猪霍乱病毒。

7.权利要求1的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中所述 缺失的基因被编码标记蛋白或抗原的基因取代。

8.权利要求7的黄病毒科的复制缺陷假性感染性病毒，其中标记 蛋白是绿色荧光蛋白。

9.表达黄病毒科病毒的C蛋白的细胞群体，其中所述表达对于使 权利要求1的复制缺陷的病毒能够在适当条件下繁殖是有效的，并且 编码C蛋白的核酸序列是密码子最优化的，使得所述密码子优化降低 细胞系编码的C蛋白与黄病毒科假性感染性病毒基因组重组的能力和 /或提高黄病毒科假性感染性病毒的生产，并且其中所述编码C蛋白 的核酸序列是SEQ ID NO：1。

10.权利要求9的细胞群体，其中利用源于病毒载体的基因工程 化复制子产生表达病毒的野生型或突变蛋白的细胞。

11.权利要求10的细胞群体，其中所述复制子表达C蛋白，所述 C蛋白包含在编码属于黄病毒科的病毒的C蛋白的基因的至少36个 核苷酸位点的突变。

12.权利要求10的细胞群体，其中所述复制子表达复制子中的C 蛋白，所述复制子包含非天然环化序列，使得所述环化序列的存在降 低复制缺陷假性感染性病毒与天然病毒的生产性重组的机会。

13.权利要求10的细胞群体，其中所述复制子表达蛋白，所述复 制子包含编码截短的C-prM连接的改变的核苷酸序列，使得所述改变 的序列的存在提高细胞培养中复制缺陷假性感染性病毒的产量，体内 提高包含prM/E的SVP产量，或其组合。

14.权利要求10的细胞群体，其中通过用体外合成的复制子 RNAs转染，通过用设计为从细胞RNA-聚合酶II-特异性启动子合成 功能性甲病毒复制子的质粒DNAs转染，或通过用包装在甲病毒结构 蛋白内部的甲病毒复制子感染，将表达黄病毒科病毒的野生型或突变 蛋白的复制子引入细胞中。

15.权利要求10的细胞群体，其中病毒载体是甲病毒。

16.权利要求15的细胞群体，其中甲病毒是委内瑞拉马脑炎病毒 (VEEV)、辛德毕斯病毒、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎 病毒(WEEV)或罗斯河病毒。