[发明专利]鉴定维生素D代谢改变的方法

说明书

本发明要求2006年1月31日提交的美国临时专利申请系列号60/763,565的优先权，该份申请的全部内容通过引用纳入本文。

本项工作受到国家癌症研究院(National Cancer Institute)基金号RO1-CA-95045-01、RO1-CA-67267-10、RO1-CA-85142-05和RO1-CA-112914-01的支持。政府对本发明享有一定权利。

发明领域

本发明总体上涉及维生素D相关疾病的领域，更具体地说涉及测定个体中维生素D代谢改变的领域。

发明背景

大量的流行病学数据提示维生素D的作用(vitamin D exposure)影响癌症(分别是前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌和淋巴瘤、黑色素瘤和肺癌)、骨质疏松和自身免疫疾病，例如多发性硬化症的死亡率。与疾病发生有关的维生素D作用的标志是住所的纬度、循环性维生素D结合蛋白、维生素D血液水平和维生素D受体多态性。然而，认真研究这些因素以预测任何给定个体是否受到维生素D作用发生异常所获得的数据相互冲突。

对于治疗骨相关疾病，补充钙和维生素D是减缓老年人的骨丧失的有效疗法。大多数个体可在其饮食中获得足够的钙，但对于发现难以做到这点的人补(钙)是一种替代方法。对于老年人和不能获得自然阳光照射且饮食不佳的居家不出之人，单用钙作为骨质疏松的疗法作用有限，但联用维生素D特别有帮助。钙三醇是给予绝经后骨质疏松妇女的活化形式维生素D。钙三醇能促进肠道吸收钙，因为没有维生素D时钙不能吸收。然而，尚不知晓钙三醇吸收和代谢中存在的个体差异是否会影响钙三醇的作用。这种信息对于定制维生素D及其类似物、代谢物的剂量至关重要。因此，需要能鉴定具体个体的维生素D代谢是否可能发生改变的方法。

发明概述

本发明提供鉴定维生素D代谢可能改变的个体的方法。该方法包括获得该个体的生物学样品，测定没有钙三醇时是否存在某些CYP24单核苷酸多态性(SNP)，和/或异常剪接的CYP24 mRNA，和/或正常剪接的CYP24 mRNA，其中没有钙三醇时存在所述SNP和/或异常剪接的CYP24和/或正常剪接的CYP24 mRNA表明该个体的维生素D代谢可能改变。

还提供了定制不会产生钙三醇那样大血钙反应(calcemic response)的钙三醇或钙三醇前体，或维生素D类似化合物的剂量的方法。该方法包括获得该个体的生物学样品，测定没有钙三醇时是否存在CYP24 SNP，和/或异常剪接的CYP24 mRNA，和/或正常剪接的CYP24 mRNA，根据这种鉴定，开出较低或较高剂量的钙三醇或钙三醇前体的处方。

附图简述

图1是描述维生素D代谢步骤的流程图。

图2图示了在未处理的和钙三醇处理的人癌细胞系中检测的CYP24酶活性。这些结果显示可根据它们的基线和钙三醇诱导的CYP24酶概况将人癌细胞系分为三类。类别I：基线和钙三醇诱导的CYP24活性可忽略的前列腺癌(LNCaP)和肺癌(H520)细胞系；类别II：钙三醇诱导的基线CYP24活性刚能检测到的前列腺癌(PC3)、乳腺癌(MCF7)和结肠癌(HT29)细胞系；类别III：基线和钙三醇诱导的CYP24活性高的前列腺癌(DU145)、乳腺癌(MDA231)、肺癌(A549)和结肠癌(HCT116)细胞系。

图3A-3D图示了CYP24 mRNA剪接模式和cDNA扩增概况。图3A图示了从外显子9到外显子11的CYP24基因，其是采用RT-PCR获得cDNA的引物位置的例子，得到正确剪接(280bp)和异常剪接(880bp)的产物。图3B图示了从外显子11到外显子12的CYP24基因和RT-PCR cDNA产物的大小，所述产物是不含预计SNP的CYP24基因的正确剪接CYP24 mRNA(150bp)以及存在预计SNP的包含内含子12序列的异常剪接CYP24 mNA(302bp转录物)。图3C是跨越CYP24 mNA的外显子9-11的未剪接或剪接CYP24 mRNA的cDNA扩增产物照片。图3D是各种癌细胞系的正确剪接(150bp)或异常剪接(302bp)的CYP24 mRNA的跨越外显子11-12的cDNA扩增产物照片。