[发明专利]鉴定维生素D代谢改变的方法

权利要求书

1.一种测定个体是否可能具有改变的钙三醇分解代谢的方法，其中，所述方法包括：

a)获得个体的生物学样品；和

b)测定是否存在

i)至少一种表2所列的单核苷酸多态性(SNP)；

ii)异常剪接的CYP24 mRNA；

iii)钙三醇不敏感的剪接；或

iv)i)到iii)的组合；

其中测定i)、ii)或它们的组合表明，与不具有i)或ii)的个体相比，该个体可能具有降低的钙三醇分解代谢，其中存在iii)表明与不具有iii)的个体相比，该个体可能具有高的钙三醇分解代谢。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，先将钙三醇给予个体来诱导所述CYP24 mRNA的异常剪接，再获得该个体的生物学样品。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述异常剪接的CYP24 mRNA包含从CYP24基因内含子11和12之间的内含子转录的多核苷酸序列。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述至少一种SNP是表2所示的4号SNP。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，通过RT-PCR扩增CYP24mRNA以获得CYP24 cDNA，相比于大小已知的标记来分析该cDNA的大小以鉴定异常剪接的CYP24 cDNA，从而确定异常剪接的CYP24 mRNA是否存在。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，利用具有如SEQ ID NO：3所示序列的第一引物和具有SEQ ID NO：4所示序列的第二引物进行所述RT-PCR，其中所述RT-PCR扩增包含CYP24基因外显子9和10之间内含子的核苷酸序列和/或CYP24基因外显子10和11之间内含子的核苷酸序列的cDNA。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过以下方式确定至少一种SNP的存在或不存在：通过PCR扩增CYP24基因中包含CYP24基因外显子9和CYP24基因外显子10之间的内含子序列的区域以获得PCR扩增产物，分析该PCR扩增产物的序列以确定所述至少一种SNP的存在或不存在。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过以下方式确定至少一种SNP的存在或不存在：通过PCR扩增CYP24基因中包含CYP24基因外显子11和CYP24基因外显子12之间的内含子序列的区域以获得PCR扩增产物，分析该PCR扩增产物的序列以确定所述至少一种SNP的存在或不存在。

9.一种测定需要维生素D治疗的个体的钙三醇、钙三醇前体或维生素D类似化合物的给药剂量方案的方法，其中所述维生素D类似化合物产生的血钙反应低于钙三醇产生的血钙反应，所述方法包括：

a)获得个体的生物学样品；和

b)测定该生物学样品中是否存在

i)至少一种表2所列的SNP；

ii)异常剪接的CYP24 mRNA；或

iii)钙三醇不敏感的剪接；或

iv)i)到iii)的组合；

其中存在i)或ii)或它们的组合表明，与不具有i)或ii)的需要维生素D治疗的个体相比，该个体是较低剂量钙三醇、钙三醇前体或维生素D类似物的候选对象，并且其中存在iii)表明与不具有iii)的需要维生素D治疗的个体相比，该个体是较高剂量钙三醇或钙三醇前体的候选对象。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，先将钙三醇、钙三醇前体或维生素D类似物给予个体来诱导所述CYP24 mRNA的异常剪接，再获得该个体的生物学样品。

11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述钙三醇前体选自：维生素D和胆钙化甾醇。

12.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述维生素D类似化合物选自：1α，25-(OH)₂-24-表-D₂，1α，25-(OH)₂-24a-高-D₃，1α，25-(OH)₂-24a-二高-D₃，1α，25-(OH)₂-19-降-D₃和20-表-24-高-1α，25-(OH)₂-D₃。