[发明专利]一种阿魏酸酯酶活性的检测方法

权利要求书

1.一种阿魏酸酯酶活性检测方法，包括步骤：将待测酶液与阿魏酸甲酯溶液混合进行反应，检测反应体系在反应起始及终止时的OD值，检测酶空白反应体系在反应起始及终止时的OD值，并通过下述公式计算酶活：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的待测酶液的制备步骤包括：在96孔的板上加入50～100μL适当稀释6～1600倍的待测酶液，35～65℃预热10～30分钟。

3.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述的待测酶液的制备步骤中在39℃预热为15分钟。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的阿魏酸甲酯溶液的制备步骤包括：称取适量104.11mg阿魏酸甲酯，充分溶于20ml无水乙醇中，用100mM MOPS缓冲液(pH4.5～7)稀释至50～200μM，35～65℃预热10～30分钟。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的阿魏酸甲酯溶液的制备步骤中稀释至100μM，pH为6.0，预热为15分钟。

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的待测酶液与阿魏酸甲酯溶液的体积比为50～100∶100～200。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的待测酶液与阿魏酸甲酯溶液的体积比为100∶200。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的反应温度为35～65℃，时间为10～30分钟。

9.如权利要求1-8任一项所述的检测方法，其特征在于，所述的所述的OD值是在340nm下用酶标仪检测。

10.如权利要求1-9任一项所述的检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)称取104.11mg阿魏酸甲酯，充分溶于20ml无水乙醇中，用100mM MOPS缓冲液(pH4.5～7)稀释至50～200μM，35～65℃预热10～30分钟，得到阿魏酸甲酯溶液；

(2)在96孔板上每孔加入适当稀释6～1600倍的待测酶液，35～65℃预热10～30分钟，得待测酶液；

(3)在步骤(2)的待测酶液中，在48个孔中分别加入步骤(1)的阿魏酸甲酯溶液，35～65℃反应10～30分钟，使用酶标仪在340nm检测反应体系在反应起始及终止时的OD值；

在另外48个孔中分别加入100mM MOPS缓冲液(pH6.0)替代阿魏酸甲酯溶液作为酶空白；

(4)通过如下公式计算阿魏酸酯酶的活性：

其中，待测酶液与阿魏酸甲酯溶液的体积比为50～100∶100～200。