[发明专利]杏丹注射剂的质量控制方法

权利要求书

1.一种杏丹注射剂的质量控制方法，其特征在于：该方法包括以下全部或部分内容：

杏丹注射剂的指纹图谱测试，包括以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以银杏叶萜类内酯成分特征为主的指纹图谱中的一种或两种。

2.按照权利要求1所述的杏丹注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的一种或两种：

a、采用液相色谱法测试以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测杏丹注射制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取适量丹参和银杏叶药材中的主要活性成分对照品，包括丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、槲皮素、山奈素、异鼠李素中的一种，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈或甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸氢二钠水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～60℃范围内；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～50个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测杏丹注射剂中以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测杏丹注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测杏丹注射剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.待测杏丹注射剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.待测杏丹注射剂指纹图谱中有5％～60％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％；

b、采用液相色谱法测试以银杏叶萜类内酯成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测杏丹注射制剂适量，加水溶解，加0.2％～30％盐酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷萃取，合并萃取液，用0.5％～20％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取液及洗液，用水洗涤，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷洗涤，合并醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷液，回收醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷至干，残渣加丙酮或甲醇或乙醇使溶解，摇匀，滤过，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取白果内酯或银杏内酯A或银杏内酯B或银杏内酯C中的一种，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈或乙腈-四氢呋喃(5～95∶95～5)或甲醇或甲醇-四氢呋喃(5～95∶95～5)，流动相B为水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190～410nm范围内的一个或几个或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测杏丹注射剂中以银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测杏丹注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测杏丹注射剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；

II.待测杏丹注射剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.待测杏丹注射剂指纹图谱中有20％～80％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％。

3.按照权利要求2所述的杏丹注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的一种或两种：

a、采用液相色谱法测试以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：精密称取待测杏丹注射制剂适量，加水制成每1ml含10mg的溶液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素钠对照品适量，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.026％磷酸溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至30分钟，流动相B的比例由2％升至22％，从30分钟至60分钟，流动相B的比例由22％升至26％；流速为1.0ml/min，检测波长为280±2nm，柱温为30℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测杏丹注射剂中以丹参和银杏叶黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测杏丹注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测杏丹注射剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测杏丹注射剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.待测杏丹注射剂指纹图谱中有10％～40％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±30％；

b、采用液相色谱法测试以银杏叶萜类内酯成分特征为主的指纹图谱：

(1)供试品溶液的制备：取待测杏丹注射制剂1.5g，加水40ml溶解，加2％盐酸溶液5滴，用醋酸乙酯提取4次，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣加丙酮适量使溶解并定量转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，滤过，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取银杏内酯A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇-四氢呋喃(25∶10)，流动相B为水，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至25分钟，流动相B的比例为65％，从25分钟至60分钟，流动相B的比例由65％降至35％，流速为0.8ml/min、蒸发光散射检测器检测，柱温30℃；

(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；

(5)以(1)～(3)所述方法作为待测杏丹注射剂中以银杏叶萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(6)将待测杏丹注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：

I.计算待测杏丹注射剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测杏丹注射剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；

III.待测杏丹注射剂指纹图谱中有30％～60％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±30％。