[发明专利]一种黄瓜高频率植株再生方法

权利要求书

1.一种黄瓜高频率植株再生方法，其特征在于由下述步骤组成：

a、选取黄瓜饱满、无病虫的种子，用0.1％氯化汞表面消毒，并接种到MS培养基上培养成苗，选取粗壮的幼苗切除一片子叶和生长点，制备Flamingo-bill外植体；所述的Flamingo-bill外植体为一种多组织成分的特殊外植体，它由子叶、下胚轴和根三部分组成；

b、将Flamingo-bill外植体接种到芽诱导培养基上，使其诱导出不定芽；外植体接种方式是将其根部斜插入培养基中，芽诱导培养基是MS培养基附加0.5～1.0mg/L 6-BA(6-苄基腺嘌呤)、0.5～1.0mg/L AgNO₃和30g/L Suc(蔗糖)；

c、将外植体连同不定芽转入增殖培养基，使不定芽的数量扩大3倍，同时不定芽得以伸长；芽增殖培养基为附加1.0～1.5mg/L 6-BA、0.5～1.0mg/L AgNO₃和30g/L Suc的MS培养基；

d、当芽长到1～2cm时从基部切离外植体，接种到生根培养基，使其生根长成完整植株；生根培养基为1/2MS培养基附加20g/L Suc；

e、将具有完整根系的植株移栽到营养土中，使其在自然条件下生长。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤a中，0.1％氯化汞浸泡种子的时间为8～10min，消毒后用无菌水冲洗4～5次，并用无菌滤纸吸干种子表面水分。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤a中，用于Flamingo-bill外植体制备的幼苗苗龄为2～3d，苗高3～4cm，下胚轴直径3～5mm。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在步骤a中，采用无菌手术刀片由上至下将一片子叶和生长点切除，切口深度为下胚轴直径的1/2，切口斜面长度为0.4～0.5cm。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的方法，其特征在于：MS培养基琼脂用量为0.7％，培养基灭菌方式为在121℃下灭菌18min，培养基的pH值为5.8。

6.根据权利要求1、2、3或4所述的方法，其特征在于：所述培养条件为温度25±1℃，光照强度为50μmol·m^-2·s^-1，光周期为12～14h/d。