[发明专利]硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硒诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定硒浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定技术领域。

背景技术

硒是生物必需的微量元素，植物硒是人类和动物获取硒的主要来源，人体过多的摄入硒能引起硒中毒。硒元素可使人体内的过氧化物分解，保护细胞膜、心、肾、肺、眼等；可清除人体的自由基，抗衰老，增强人体免疫功能，可抑制多种致癌物质，人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症。

结合国内外有关硒的各种检测方法.其中常用的测定方法：如原子吸收光谱法(AAS)、原子荧光光谱法(AFS)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)等；原子吸收光谱(AAS)作为元素特效检测器与GC联用已成为微量元素分析的主要方法。另外还有，应用液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)鉴定硒化合物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用硒依赖性的酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定硒浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的硒诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行硒浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明硒浓度测定方法原理如下：

谷胱甘肽二硫+2水  谷胱甘肽过氧化物酶/Se

                            2谷胱甘肽+过氧化氢

过氧化氢+乙醇  过氧化氢酶  乙醛+水

乙醛+还原型辅酶  酒精脱氢酶  乙醇+辅酶

这种方法利用硒依赖性的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase；EC1.11.1.9)酶(偶)联过氧化氢酶(catalase；EC1.11.1.6)、酒精脱氢酶(Alcohol dehydrogenase；EC1.1.1.1)酶促反应连续监测法/速率比色法。谷胱甘肽过氧化物酶酶解谷胱甘肽二硫反应产生过氧化氢，再通过(偶)联合过氧化氢酶、酒精脱氢酶的作用，最终将还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)氧化成为辅酶(在340nm处没有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度下降的程度/速度，通过测量340nm处吸光度下降的程度/速度，可以测算硒的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明硒诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液                                   100mmol/L

稳定剂                                   500mmol/L

还原型辅酶                               0.25mmol/L

谷胱甘肽过氧化物酶                       10000U/L

过氧化氢酶                  10000U/L

酒精脱氢酶                  12000U/L

谷胱甘肽二硫                10mmol/L

乙醇                        8mmol/L

本发明的硒诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、

酒精脱氢酶、谷胱甘肽二硫、乙醇。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、谷胱甘肽二硫、乙醇。

试剂2

缓冲液、稳定剂、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、酒精脱氢酶。

还原型辅酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、酒精脱氢酶、谷胱甘肽二硫、乙醇在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：

试剂1