[发明专利]一种通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过生物反应器的方法大量繁殖蝴蝶兰的方法。

背景技术

蝴蝶兰(Phalaenopsis)被誉为“兰花王后”，有极高的观赏价值和商业价值。蝴蝶兰种苗传统繁殖方式为分株繁殖或用组织培养以芽增方式快繁，繁殖系数繁殖系数一般只有2.0左右，从一个新品种开始进行工厂化快繁到形成10万株左右总产量，至少需要四年时间。

发明内容

本发明提供了一种通过生物反应器快速量多繁殖蝴蝶兰的方法，它能解决优良品种在较短时间内难以形成规模产量的问题。

本发明采用了以下技术方案如下：一种通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，它采用如下步骤：步骤一，将需要快速繁殖的蝴蝶兰培育至抽出花梗，若已抽花梗，直接用刀切取；步骤二，将切取的花梗进行第一次消毒，消毒后用刀沿着花梗的外围切一圆周伤口，用镊子折断，然后将折断后的花梗节段置入消毒后的玻璃瓶中进行第二次消毒，剥开苞叶，再进行第三次消毒，然后用无菌水冲洗干净，在节芽两侧切成带一个节芽的小段，并剥去节芽外的苞衣，按形态学原理的正向斜插于适宜的培养基上；步骤三，取诱导出的营养芽上长出的幼叶，切成小块，将切成的小块在适宜的激素组合和适宜的培养基上，诱导体细胞胚胎团的发生，选取不同发育阶段的体细胞胚胎团，切割成材料块，材料块用FAA固定，然后进行抽气，在通过正丁醇逐级脱水，石蜡透入包埋，常规石蜡切片，番红-固绿对染，在显微镜下观察照相，建立档案；步骤四，对体胚进行刺伤处理后，接种在适宜的液体培养基上快速大量增殖；步骤五，将得到的含有体细胞胚胎的液体培养基点滴在适宜的分化培养基上诱导小植株的产生；步骤六，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽；步骤七，对小苗进行正常管理，培育至成品花。

本发明步骤二中第一次消毒采用棉花沾75％的酒精进行消毒；第二次消毒采用的是在玻璃瓶内倒入1.0％的次氯酸钠溶液进行消毒；第三次消毒采用0.75％的次氯酸钠溶液进行消毒5分钟。本发明步骤二中适宜的培养基为Hopnex培养基。本发明步骤二带一个节芽的小段距节芽两端的距离为1-1.5cm。本发明步骤三中适宜的培养基为Hopnex培养基，材料块的大小为0.2cm×0.2cm×0.2cm的材料块。本发明步骤三中FAA为70％FAA，切片的厚度为8-10μm。本发明步骤四适宜的液体培养基为以MS为基本的液体培养基，培养条件包括温度为25℃，光照度为200-4001x，每天光照16小时，摇床转速为120r/min诱导体细胞胚的产生。本发明步骤五的液体培养基为以MS为基本的液体培养基，适宜的分化培养基为Hopnex培养基，培养条件为温度为25℃，光照度为200-14001x。本发明步骤六的培养条件为温度为25℃，光照度为200-14001x。

采用如上技术方案，本发明利用细胞全能性的原理，使蝴蝶兰种苗在规模生产时直接通过生物反应器的方式进行，较短时间内得到大量单细胞起源的、同步性好的胚性细胞和两极性的胚状体，进而得到大量个体间遗传背景一致、无性系变异小的完整植株，从而解决了在较短时间内形成规模产量的问题，极大地节约了生产成本，缩短了繁殖周期。

具体实施方式

本发明为一种通过生物反应器的方式大量繁殖蝴蝶兰的方法，它采用如下步骤：首先选择将需要快速繁殖的蝴蝶兰品种，用数码相机拍照，存档保存亲本图像资料，然后进行如下操作：步骤一，将需要快速繁殖蝴蝶兰培育至抽出花梗，若已抽花梗，直接用解剖刀切取；步骤二，将切取的花梗用棉花沾75％的酒精消毒后，用锐利的解剖刀沿着花梗的外围切一圆周伤口，然后用镊子折断，再将折后的花梗节段置入消毒后的玻璃瓶内，倒入1.0％次氯酸钠溶液消毒，用解剖刀剥开苞叶，再倒入0.75％的次氯酸钠溶液中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗干净，在距节芽两端约1-1.5cm处切成带一个节芽的小段，并剥去节芽外的苞衣，按形态学原理的正向斜插于适宜的培养基上，培养基为Hopnex培养基；步骤三，取诱导出的营养芽上长出的幼叶，切成小块，将切成的小块在适宜的激素组合和适宜的培养基上，培养基为Hopnex培养基，诱导体细胞胚胎团的发生，选取不同发育阶段的体细胞胚胎团，用锋利的单面刀片切割成0.2cm×0.2cm×0.2cm的材料块，材料用FAA(70％)固定，注射器抽气，在经过正丁醇逐级脱水，石蜡透入包埋，常规石蜡切片，切片厚度8-10μm，番红-固绿对染，显微镜下观察照相，建立档案；步骤四，对体胚进行刺伤处理后，接种在适宜的液体培养基上快速大量增殖，适宜的液体培养基以MS为基本的液体培养基，培养条件包括温度为25℃，光照度为200-4001x，每天光照16小时，摇床转速为120r/min诱导体细胞胚的产生；步骤五，将得到的含足够数量体细胞胚的液体培养基点滴在适宜的分化培养基上诱导小植株的产生，液体培养基以MS为基本的液体培养基，适宜的分化培养基为Hopnex培养基；步骤六，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽，培养条件为温度为25℃，光照度为200-14001x；步骤七，对小苗进行正常管理，培育至成品花。本发明在繁殖前选择需要快繁的蝴蝶兰品种，用数码相机拍照，存档保存亲本图像资料。