[发明专利]一种通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法

权利要求书

1.一种通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，它采用如下步骤：

步骤一，将需要快速繁殖的蝴蝶兰培育至抽出花梗，若已抽花梗，直接用刀切取；

步骤二，将切取的花梗进行第一次消毒，消毒后用刀沿着花梗的外围切一圆周伤口，用镊子折断，然后将折断后的花梗节段置入消毒后的玻璃瓶中进行第二次消毒，剥开苞叶，再进行第三次消毒，然后用无菌水冲洗干净，在节芽两侧切成带一个节芽的小段，并剥去节芽外的苞衣，按形态学原理的正向斜插于适宜的培养基上；

步骤三，取诱导出的营养芽上长出的幼叶，切成小块，将切成的小块在适宜的激素组合和适宜的培养基上，诱导体细胞胚胎团的发生，选取不同发育阶段的体细胞胚胎团，切割成材料块，材料块用FAA固定，然后进行抽气，在通过正丁醇逐级脱水，石蜡透入包埋，常规石蜡切片，番红-固绿对染，在显微镜下观察照相，建立档案；

步骤四，对体胚进行刺伤处理后，接种在适宜的液体培养基上快速大量增殖；

步骤五，将得到的含有体细胞胚胎的液体培养基点滴在适宜的分化培养基上诱导小植株的产生；

步骤六，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽；

步骤七，对小苗进行正常管理，培育至成品花。

2.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤二中第一次消毒采用棉花沾75％的酒精进行消毒；第二次消毒采用的是在玻璃瓶内倒入1.0％的次氯酸钠溶液进行消毒；第三次消毒采用0.75％的次氯酸钠溶液进行消毒5分钟。

3.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤二中适宜的培养基为Hopnex培养基。。

4.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤二带一个节芽的小段距节芽两端的距离为1-1.5cm.

5.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤三中适宜的培养基为Hopnex培养基，材料块的大小为0.2cm×0.2cm×0.2cm的材料块。

6.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤三中FAA为70％FAA，切片的厚度为8-10μm。

7.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤四适宜的液体培养基为以MS为基本的液体培养基，培养条件包括温度为25℃，光照度为200-4001x，每天光照16小时，摇床转速为120r/min诱导体细胞胚的产生。

8.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤五的液体培养基为MS为基本的液体培养基，适宜的分化培养基为Hopnex培养基，培养条件为温度为25℃，光照度为200-14001x。

9.根据权利要求1所述的通过生物反应器的方法繁殖蝴蝶兰的方法，其特征是步骤六的培养条件为温度为25℃，光照度为200-14001x。