[发明专利]无动物细胞培养方法

权利要求书

1.缺少一级动物来源的外源成分的细胞培养基，包括

i)选自下组的至少一种非动物二级来源的外源生长因子：EGF，FGF，三-碘-L tyronine和氢化可的松，和；

ii)非动物二级来源的IGF-1和/或胰岛素中的至少一种。

2.如权利要求1的细胞培养基，其中，所述培养基包括两种或两种以上选自下组的非动物二级来源的外源生长因子：EGF，FGF，三-碘-L tyronine和氢化可的松，以及非动物二级来源的IGF-1和/或胰岛素中的至少一种的组合。

3.如权利要求2的细胞培养基，其中，所述培养基包括非动物二级来源的EGF，FGF，三-碘-L tyronine和氢化可的松以及非动物二级来源的IGF-1和/或胰岛素中的至少一种的组合。

4.如权利要求1-3中任意一项的细胞培养基，其中所有成分都是非动物一级和二级来源的。

5.如权利要求1-4中任意一项的细胞培养基，还包括非动物来源的蛋白质水解产物。

6.如权利要求5的细胞培养基，其中，所述蛋白质水解产物来自小麦。

7.如权利要求1-5中任意一项的细胞培养基，其中，所述细胞培养基适合培养动物，优选人二倍体贴壁依赖性细胞。

8.如权利要求1-6中任意一项的细胞培养基，其中，当EGF存在时，其浓度大约为0.00001-0.3mg/l；当FGF存在时，其是bFGF形式的，浓度大约为0.00001-0.1mg/l；当三-碘-L tyronine存在时，其浓度大约为0-1mg/l；当氢化可的松存在时，其浓度大约为0-10mg/l；当IGF-1存在时，其浓度大约为0.00001-5mg/l；当胰岛素存在时，其浓度大约为0.1-1000mg/l。

9.如权利要求1-8中任意一项的细胞培养基，其中，所述培养基是新鲜培养基和条件培养基的混合物。

10.一种动物，优选人类二倍体贴壁依赖性细胞系，适合在权利要求1-9中任意一项的培养基中生长。

11.一种动物，优选人类二倍体贴壁依赖性细胞系，适合在权利要求1-9中任意一项的培养基中生产生物学产物。

12.如权利要求1的细胞系，其中，所述生物学产物是病毒。

13.如权利要求10-12中任意一项的细胞系，选自下组：MRC-5，WI-38，TIG-1，TIG-7，FRhL-2，MRC-9，IMR-90和IMR91。

14.一种生产条件培养基的方法，包括将权利要求1-8中任意一项的新鲜培养基与动物或优选人类二倍体贴壁依赖性细胞组合，以便产生条件培养基。

15.一种生产动物或优选人类二倍体贴壁依赖性细胞的方法，包括：

a)将所述细胞接种在权利要求1-9中任意一项的细胞培养基中，并且让所述细胞附着在基质上；

b)收获从步骤a)得到的条件培养基，并且从所述基质上分离所述细胞层，并且用非动物来源的蛋白酶解离细胞，以便形成细胞悬浮液；

c)将步骤b)的细胞悬浮液接种到装在包括附着支持物的培养装置中的所述培养基中，使得细胞附着；和

d)在相同的培养基中生长所述细胞。

16.如权利要求15的方法，还包括冷冻在步骤b)中收获的细胞，以便产生细胞库。

17.如权利要求15或16的方法，其中，用于步骤a)和c)中的任意一个步骤的所述细胞培养基是：i)条件培养基或ii)新鲜培养基或iii)条件培养基和新鲜培养基的混合物。

18.如权利要求17的方法，其中，所述条件培养基是按1∶0-0∶1的比例(新鲜∶条件)用新鲜培养基稀释。

19.如权利要求17的方法，其中，所述条件培养基是按7∶1-1∶7的比例(新鲜∶条件)用新鲜培养基稀释。

20.如权利要求17的方法，其中，所述条件培养基是按3∶1-1∶3的比例(新鲜∶条件)用新鲜培养基稀释。

21.如权利要求17的方法，其中，所述条件培养基是按3∶1的比例(新鲜∶条件)用新鲜培养基稀释。