[发明专利]一种检测结核杆菌的试剂盒及其专用探针与引物

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测细菌的试剂盒及其专用探针与引物，特别是涉及一种检测结核杆菌的试剂盒及其专用探针与引物。

背景技术

结核病是严重危及全球的公共卫生问题之一，自1985年以来结核病疫情在全球范围内急剧上升，据世界卫生组织报道，目前全球有近1/3的人感染了结核杆菌，即20亿人口感染了结核杆菌，其中活动性肺结核病人约2000万，每年新增结核病人约800万-1000万，每年约有300万人死于结核病。结核病已成为导致全世界成人因传染病而死亡的主要疾病之一。我国是全球22个结核病高发国家之一，活动性肺结核病人数居世界第二位。据2000年全国结核病流行病学抽样调查估计，全国现有活动性肺结核病人450万，其中传染性肺结核病人150万。

临床诊断肺结核的主要依据是检测痰液中结核分枝杆菌(MycobacteriumTuberculosis，TB)，其中，涂片法简单易行，但阳性率较低；罗氏培养法虽然是金标准，但检测周期长，均难以满足临床需要。近年来，作为分枝杆菌种系鉴定及药敏的许多分子生物学方法得到长足发展，这些方法能将诊断的时间从几周缩短到几天，其中实时荧光定量PCR因其技术成熟，具有较高的灵敏性和特异性，已逐步应用到临床中。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测结核杆菌的专用探针和引物。

本发明所提供的专用探针，其碱基序列如SEQ IN NO：3所示；专用引物由正向引物和反向引物组成，所述正向引物的碱基序列如SEQ IN NO：1所示，所述反向引物的碱基序列如SEQ IN NO：2所示。

所述探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。

本发明的第二个目的是提供一种用于结核杆菌检测的试剂盒。

本发明所提供的结核杆菌检测试剂盒包括上述检测结核杆菌的特异性探针及通用引物。

为了方便使用，本发明所提供的结核杆菌检测试剂盒还包括结核杆菌基因PCR扩增试剂，以及结核杆菌标准品。

所述结核杆菌基因PCR扩增试剂为2×Probe-PCR Master Mix。

所述结核杆菌标准品包括阳性定量参考品、阴性质控品、临界阳性质控品和强阳性质控品，其中阳性定量参考品的浓度梯度为10⁸、10⁷、10⁶、10⁵copies/mL。

本发明的第三个目的是提供一种利用上述试剂盒对结核杆菌进行检测的方法。

本发明所提供的检测结核杆菌的方法，是以待测痰液提取的DNA为模板，用上述试剂盒进行荧光定量PCR检测。

本发明针对现有结核杆菌检测方法检测周期长、阳性率低的不足，提供了一种快速简单、特异性较强、灵敏度较高的检测结核杆菌的试剂盒，可广泛用于结核杆菌的诊断，具有重要的实际应用价值。利用本发明方法对疑似结核痰标本50例进行检测，结果表明，阳性检出准确率达98％以上，表明该方法具有较高的检出率。

附图说明

图1为定量曲线

图2为琼脂糖凝胶电泳验证本发明试剂盒的可靠性

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

实施例1、检测结核杆菌的专用探针和引物的设计

根据对NCBI数据库结核杆菌基因序列分析，以Genbank号分别为CP000717.1，