[发明专利]新的蟾蜍二烯内酯类化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及蟾蜍二烯内酯类的新化合物或其药学上可接受的盐以及包含该化合物的蟾蜍二烯内酯提取物或者药物组合物。本发明还涉及该类化合物的制备方法以及在抑制肿瘤细胞方面的应用。

背景技术

蟾蜍属动物有250多种，分布于世界各地。我国有近10种，主要分布的3种分别是：大蟾蜍华西亚种(Bufo bufo andrewsi Schmidt)、大蟾蜍中华亚种(Bufo bufo gargarizans Cantor)以及黑眶蟾蜍(Bufo melanostitus Schneider)。蟾蜍之名首载于《名医别录》，早在《神农本草经》就载有“虾蟆”的性味与主治。《本草蒙筌》：“味辛、气凉、微毒”，《本草再新》：入心、肝、脾、肺四经。古今验方广泛应用蟾蜍拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。

以蟾蜍为基原的常用中药材有蟾酥、蟾皮、干蟾，其化学成分相当复杂，按溶解性可分为脂溶性甾族类(蟾毒配基类、蟾蜍毒素类)、水溶性吲哚生物碱类。

蟾毒配基属乙型强心甾族类化合物，在C₁₇上接有一个A-吡喃酮基，又名蟾蜍二烯类酯(Bufodienolide)，主要存在于蟾蜍耳后腺及皮肤腺的分泌物中，现已知有20余种，例如蟾毒灵(bufalin)、日蟾毒它灵(gamabufotalin)、蟾毒它灵(bufotalin)、华蟾毒精(cinobufagin)、脂蟾毒配基(resibufogenin)等。

蟾蜍毒素由蟾毒配基的C₃-羟基与辛二酰、琥珀酰、己二酰、庚二酰精氨酸分别结合成酯及硫酸酯类化合物，易分解为蟾毒配基。根据蟾毒配基不同可分为13类。【江成亮、竺叶青，蟾蜍抗肿瘤作用研究进展，天然产物研究与开发，2000.12(1)，67～72】。例如蟾毒它灵-3-丁二酰精氨酸酯、蟾毒灵-3-丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯、Cinobufotalitoxin等。Cinobufotalitoxin【Studies on Cardiotonic Steroids from the Skin of Japanese Toads.Shimada，K.，Fujii，Y.，Yamashita，E.，et al.Chemical & Pharmaceutical Bulletin，1977.25(4)，714-730】结构式如下：

现已有蟾酥镇痛膏、蟾酥注射液、华蟾素注射液和复方蟾皮胶囊等制剂应用于临床抗肿瘤、镇痛、利水消肿、增强机体免疫力。蟾蜍制剂在临床上用于肿瘤的辅助治疗具有标本兼治的优点，能够显著抑制肿瘤的转移、提高机体免疫力，与化疗药物相比，具有能够减轻肿瘤患者痛苦，显著改善生活质量，延长生命周期的特点，同时也能够与化疗药物联合使用增强疗效。

然而，目前的蟾蜍制剂，都是以粗提取物入药，成分极为复杂，除含有蟾毒配基、蟾蜍毒素、吲哚类生物碱(如5-羟色胺，蟾蜍色胺、蟾蜍噻咛等)外，还含有氨基酸、还原糖、甾类、肽类等多种类型的化学成分。因此，在临床使用中，蟾蜍制剂具有以下两个主要缺点：①对肿瘤细胞的杀伤率低，②出现过敏反应，血管刺激症状，消化道和心脏毒性等不良反应的发生率高，这都是由于未能去除无效、不良反应成分，未能对真正的有效的成份进行控制造成的。

鉴于以上原因，本发明人经过深入研究，从蟾蜍中提取分离得到了一种新的蟾蜍二烯内酯类化合物，经过体外试验证明其具有较好的抑制肿瘤细胞的作用。并且本发明人还提供了化合物和蟾蜍二烯内酯提取物适于工业化生产的提取分离方法。

发明内容

本发明提供了一种新的化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下：

其中，R1选自

或

R₂为CHO或CH3；

R₃为OH或H；

R₄为OH，R₅为H；或者R₄和R₅为-O-

R6为H或OAc。

所说的化合物具体为：

化合物I、

化合物II、

化合物III

化合物IV

化合物V

本发明所说的盐是指药学上可接受的盐，例如与盐酸、硫酸、磷酸等酸形成的盐，或者与氢氧化钠、氢氧化钾等碱形成的盐。

本发明还提供了一种含有该化合物或其盐的蟾蜍二烯内酯提取物，其中蟾蜍总二烯内酯的重量百分含量为30-100％，优选为50-100％，更优选为90％-100％。