[发明专利]新的蟾蜍二烯内酯类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种新的蟾蜍二烯内酯类化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下：

其中，R1选自

或

R₂为CHO或CH3；

R₃为OH或H；

R₄为OH，R₅为H；或者R₄和R₅为-O-

R6为H或OAc。

2.根据权利要求1所述的蟾蜍二烯内酯类化合物，其选自：

化合物I、

化合物II、

化合物III、

化合物IV、

化合物V。

3.含有权利要求1或2的一种或多种化合物或其盐的蟾蜍二烯内酯提取物。

4.根据权利要求3所述的蟾蜍二烯内酯提取物，其特征在于其中蟾蜍总二烯内酯的重量百分含量为30-100％。

5.根据权利要求4所述的蟾蜍二烯内酯提取物，其特征在于其中蟾蜍总二烯内酯的重量百分含量为50-100％。

6.根据权利要求5所述的蟾蜍二烯内酯提取物，其特征在于其中蟾蜍总二烯内酯的重量百分含量为90-100％。

7.根据权利要求3-6所述蟾蜍二烯内酯提取物的制备方法为：干蟾、蟾皮或蟾酥用乙醇提取，回收乙醇后浓缩液上大孔树脂柱，先用水及低浓度的乙醇洗脱，再用高浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，干燥或精制即得。

8.根据权利要求3-6所述蟾蜍二烯内酯提取物的制备方法为：干蟾、蟾皮或蟾酥用乙醇提取，回收乙醇后浓缩液上大孔树脂柱，先用水及低浓度的乙醇洗脱，再用高浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，先以乙酸乙酯萃取，再以正丁醇萃取，收集正丁醇萃取部分，减压回收溶剂，干燥即得。

9.根据权利要求3-6所述蟾蜍二烯内酯提取物的制备方法为：干蟾、蟾皮或蟾酥用乙醇提取，回收乙醇后浓缩液上大孔树脂柱，先用水及低浓度的乙醇洗脱，再用高浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，收集相应留份，回收溶剂，干燥即得。

10.根据权利要求7-9所述蟾蜍二烯内酯提取物的制备方法，其特征在于其中所说的低浓度乙醇是指10-50％的乙醇，高浓度乙醇是指60-100％的乙醇。

11.根据权利要求7-9所述蟾蜍二烯内酯提取物的制备方法，其特征在于其中所说的低浓度乙醇是指30-40％的乙醇，高浓度乙醇是指70-100％的乙醇。

12.根据权利要求1或2所述化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：取所述蟾蜍二烯内酯提取物，上硅胶色谱柱，用氯仿-甲醇-水进行梯度洗脱，然后经HPLC精制，即得。

13.根据权利要求1或2所述化合物的制备方法为，其特征在于包括如下步骤：取蟾蜍二烯内酯提取物，上硅胶色谱柱，用氯仿-甲醇-水(CHCl₃-MeOH5∶1→CHCl₃-MeOH-H₂O10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1→MeOH)进行梯度洗脱，分为16个部分(Franction1-16)；Franction2回收溶剂，所得固体为化合物I粗品，粗品上HPLC(Rp C-18色谱柱)精制收集其中主要的色谱峰，回收溶剂，得到化合物I；

Franction12上ODS柱，以水-甲醇梯度洗脱，得到17个流份(SubFr1-17)；

上述SubFr14经HPLC(Rp C-18色谱柱)分离，得到化合物II及化合物III；

上述SubFr12经HPLC(Rp C-18色谱柱)分离，得到化合物IV；

Franction14上ODS柱，以水-甲醇梯度洗脱，得到15个流份(SubFr1-15)；

上述SubFr14经HPLC(Rp C-18色谱柱)分离，得到化合物V。

14.根据权利要求1-3所述的化合物或蟾蜍二烯内酯提取物对肿瘤细胞的抑制作用，以及在制备抗肿瘤药物中的应用。

15.根据权利要求1-3所述的化合物或蟾蜍二烯内酯提取物，其特征在于可以以片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、乳剂、注射液或冻干粉针剂的形式存在。