[发明专利]鉴别猪口蹄疫免疫动物与感染动物的ELISA试剂盒

权利要求书

1.鉴别猪口蹄疫免疫动物与感染动物的ELISA试剂盒，包括两块96孔板，标号为A、B、C、D、E、F、G的7瓶溶液，48个Eppordorf管和加样及检测步骤说明书组成，其特征在于：溶液A为猪口蹄疫(FMDV)阳性血清即一抗25μL；溶液B为阴性血清25μL；溶液C为HRP标记的兔抗猪IgG血清，即二抗12μL；溶液D为一抗及二抗稀释液45mL；溶液E为显色液25mL；溶液F为终止液12mL；溶液G为洗涤缓冲液500mL；两块96孔板其一包被FMDV非结构蛋白3ABC所有线性抗原表位的蛋白NS-AGD纯化产物，其二包被具有较广抗原谱的结构蛋白VP1突变蛋白CHA/99纯化产物。

2.如权利要求1所述鉴别猪口蹄疫免疫动物与感染动物的ELISA试剂盒，其特征在于它的检测方法为如下步骤：

(1)将10μL待检血清加入到900μL溶液D中进行100倍稀释，阳性血清(A)和阴性血清分(B)别取20μL，加入到800μL溶液D中进行100倍稀释，稀释在Eppordorf管中进行，充分混匀；

(2)两个96孔板中相应位置分别加入稀释的待检血清、阳性对照和阴性对照各100μL，置于湿盒中37℃作用1h；

(3)每孔加200μL溶液G进行洗涤，每次洗涤5分钟，共洗涤6次，在微量振荡器中进行；

(4)将10μL溶液C加入25mL溶液D中进行2500倍稀释，充分混匀后取100μL加入96孔板各孔中，置于湿盒中37℃温育45min，甩干；

(5)每孔加200μL溶液G后于微量振荡器中洗涤，每次洗涤5分钟后甩干，共洗涤6次；

(6)每孔避光加入溶液E 100μL，37℃湿盒作用10min；

(7)每孔加入溶液F 50μL终止反应，测定OD492；

(8)结果以cut-off判定：当进行感染动物非结构蛋白检测时，待测样品OD₄₉₂≥0.443判为阳性，＜0.443则判为阴性；当进行免疫动物结构蛋白检测时，待测样品OD₄₉₂≥0.450判为阳性，＜0.450则判为阴性。