[发明专利]河豚鱼皮活性胶原蛋白及其肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种来源于鱼的活性胶原蛋白及其肽的制备技术，特别是用微生物处理的技术领域。

背景技术

研究表明，活性胶原蛋白有着多种生理功能，其在医药、化工、食品等领域有着广泛的应用，其酶解产物胶原蛋白肽也具有多种生理功效，主要表现在抗氧化、降血压、降血脂、抗肿瘤等。因此人们对胶原蛋白及其肽类的研究开发相当关注。胶原蛋白的利用首先是从陆生动物开始的，但仅是陆生动物的胶原蛋白制品难以满足人们的需求，因此，近几年，人们把目光转向了胶原蛋白资源更丰富的水产动物，尤其是淡水以及海水鱼类。秦玉青等研究了鱿鱼皮胶原蛋白提取的最佳工艺条件(中医研究，2002，1：20-21)，王静凤等(中国专利申请号200710013140.2)提供了一种鱿鱼皮胶原蛋白活性肽的制备方法，他们都是单独的制备胶原蛋白或胶原蛋白活性肽，没有把二者制备的工艺结合起来，以达到对原料更充分的利用。

河豚鱼是琼目、河豚科的水产动物，它含有剧毒物质河豚鱼毒素，因此对它的开发利用存在一定的困难，目前对于河豚鱼的研究大都停留在河豚鱼毒素上，而对河豚鱼其它方面的研究涉猎的不多。陈丁丁等(中国专利申请号03152847.3)采用常规的制取明胶的方法制备河豚胶，并对其医药保健用途进行了研究，但没有进行河豚鱼皮胶原蛋白活性肽的提取研究。

发明内容

本发明利用无毒的河豚鱼皮，提供一种将河豚鱼皮活性胶原蛋白与其活性肽的结合起来制备的方法，达到对河豚鱼皮高的利用率，保持制备的胶原蛋白的结构及生理功能，制取高活性的河豚鱼胶原蛋白肽，不仅解决了河豚鱼下脚料的环境污染问题，而且提高了产品的附加值，拓宽河豚鱼的利用领域。

本发明的技术方案按如下所述实现：

(一)活性胶原蛋白的制取

1.原料处理

将河豚鱼皮剪成小块冷冻干燥，然后用粉碎机将其粉碎。

2.非胶原蛋白的去除

将冷冻干燥粉碎后的鱼皮放入5～100倍体积0.5～15％的氯化钠溶液中，在0～4℃下搅拌12h，然后在10000r/min、0～4℃条件下离心10～30min，弃去上清液，以除去非胶原蛋白，沉淀用于提取活性胶原蛋白。其中以粉碎鱼皮放入50～100倍体积5～15％的氯化钠溶液中，在0～4℃下搅拌12h为好。

3.活性胶原蛋白的提取

将除去非胶原蛋白的鱼皮放入5～100倍体积0.05～1％醋酸溶液中，在0～10℃的低温条件下，按1000～10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解时间8～96h，然后在5000r/mim 0～5℃下离心10～30min。将上清液通过5000～100000Da的超滤膜，收集超滤的上面部分，在-20～-80℃下冷冻干燥。其中以除去非胶原蛋白的鱼皮放入20～100倍体积0.5～1.0％醋酸溶液中，在0～10℃的低温条件下，按3000～10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解时间50～100h为好。得到的河豚鱼皮胶原蛋白色泽洁白，无酸味，略有轻微的腥味，纯度可达80％以上。所制得的胶原蛋白可用于医药、化工、食品等领域。离心所得到的沉淀用于制备胶原蛋白活性肽。

(二)胶原蛋白肽的制备

1.原料处理

将(一)中制备活性胶原蛋白后离心所剩下的沉淀用去离子水洗至pH2.0～7.0，在4000r/min条件下离心10min，弃上清，沉淀用于胶原蛋白肽的制备。

2.胶原蛋白肽的制备

在20～85℃、pH值2.0～10.0的条件下，按1000～12000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解0.5～10.0h后在80～120℃下灭酶2～5min。在4000r/min下离心10～20min，上清液分别通过10000Da、5000Da、3000Da、1000Da的超滤膜，得到10000以上、5000～10000、3000～5000、1000～3000、1000以下等不同分子量范围的河豚鱼皮胶原蛋白肽。经喷雾干燥或冷冻干燥后得到淡黄色或白色粉状、复溶性好、略带腥味的河豚鱼皮胶原蛋白活性肽。其中以在40～85℃、pH值6.0～10.0的条件下，按3000-10000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解1.5-10.0h为好。

本发明以无毒河豚鱼皮为原料，以酶解物队羟自由基清除率为指标，从木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶中优选出最高清除率的一种酶为木瓜蛋白酶。

本发明制得的河豚鱼皮胶原蛋白活性肽有较好的抗氧化性，可用于食品、药品及化妆品的有效成分，发挥其清除自由基，降低衰老程度的作用。