[发明专利]河豚鱼皮活性胶原蛋白及其肽的制备方法

权利要求书

1.一种胶原蛋白、及其肽的制备方法，其特征在于河豚鱼皮的活性胶原蛋白及其肽的制备方法，工艺操作步骤为：

一.活性胶原蛋白的制取：

(1)原料处理：将河豚鱼皮剪成小块冷冻干燥，然后用粉碎机粉碎；

(2)非胶原蛋白的去除：将冷冻干燥粉碎后的鱼皮放入5-100倍体积0.5～15％的氯化钠溶液中，在0～4℃下搅拌12h，然后在10000r/min、0～4℃下离心10～30min，弃上清液，以除去非胶原蛋白，沉淀用于提取活性胶原蛋白；

(3)活性胶原蛋白的提取：将除去非胶原蛋白的鱼皮放入5～100倍体积的0.05～1％醋酸溶液中，在0～10℃下，按1000～10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解8～96h，在5000r/min、0～5℃下离心10～30min，将上清液通过5000～100000Da的超滤膜，收集超滤的上面部分，在-20～-80℃下冷冻干燥，得到的河豚鱼皮胶原蛋白；色泽洁白，无酸味，略有轻微的腥味，纯度可达80％以上；

二.胶原蛋白肽的制备：

(1).原料处理：将(一)中制备活性胶原蛋白离心后所得到的沉淀用去离子水洗至pH2.0～7.0，4000r/min离心10min，沉淀用于胶原蛋白肽的制备；

(2).胶原蛋白肽的制取：在20～85℃、pH2.0～10.0下，按1000～12000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解0.5～10h，后80～120℃下灭酶2～5min，在4000r/min下离心10～20min，上清液分别通过10000Da、5000Da、3000Da、1000Da的超滤膜，得到10000以上、5000～10000、3000～5000、1000～3000、1000以下不同分子量范围的河豚鱼皮胶原蛋白肽，经喷雾干燥或冷冻干燥后得到淡黄色或白色粉状、复溶性好、略带腥味的河豚鱼皮胶原蛋白活性肽。

2.根据权利要求1所述胶原蛋白、及其肽的制备方法，其特征在于活性胶原蛋白的制取的(2)非胶原蛋白的去除的步骤中，粉碎鱼皮放入50～100倍体积5～15％的氯化钠溶液中，在0～4℃下搅拌12h。

3.根据权利要求1所述胶原蛋白、及其肽的制备方法，其特征在于活性胶原蛋白的制取的(3)活性胶原蛋白的提取步骤中，除去非胶原蛋白的鱼皮放入20～100倍体积0.5～1.0％醋酸溶液中，在0～10℃的低温条件下，按3000～10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解时间50～100h。

4.根据权利要求1所述胶原蛋白、及其肽的制备方法，其特征在于胶原蛋白肽的制备的(2).胶原蛋白肽的制取步骤中，在40～85℃、pH值6.0～10.0的条件下，按3000～10000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解1.5～10.0h。