[发明专利]抗牛朊蛋白PrP27－30的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及采用基因工程制备一种单克隆抗体(以下简称为单抗)及其制备方法和用途，确切讲是用基因工程制备的抗牛朊蛋白PrP27-30的单抗mab-PrP102-6，以及这种单抗的制备方法和用途。

背景技术

疯牛病是进行性、致死性人畜共患传染病，国际兽疫局将疯牛病列为A类传染病，我国也将其列入进出口牛及牛产品检疫检验过程中常规检验传染病之一，而且每年对本土牛也开展适量的普检。近些年，疯牛病给许多国家尤其是欧盟各国的畜牧业造成了严重的经济损失。目前，各国对疯牛病仍然没有有效的防治措施，无药物、疫苗、血清等制品可以应用。因此，早发现、早诊断、早捕杀是防止疯牛病暴发的最有效手段。脑组织病理学检测是该病诊断的金标准，但是无法在患病早期确诊。各种用于诊断致病原存在的免疫诊断技术，例如免疫组化、免疫印迹和酶联免疫吸附分析等方法，由于具有速度快，灵敏度高，特异性强，方法多，能适应不同检验需要的优势，已经成为现今诊断疯牛病的最主要方法。其中，单抗是免疫诊断的关键试剂。此外，单抗也是研究蛋白质的结构与功能的重要工具。不同单抗的可变区序列是不同的，在单抗轻、重链可变区编码基因序列基础上可以进一步制备出单链抗体，单链抗体由于独特的优势在某些领域逐渐代替了单抗，在诊断和治疗方面越来越发挥重要作用。

被科学界广为接受的“唯蛋白”理论认为疯牛病、羊的痒病和人的克雅氏病等海绵状脑病的病原是一种不含有核酸的蛋白质----朊病毒，即宿主体内一种正常存在的蛋白质PrP^C(Cellular Prion Protein，细胞型朊蛋白)构像转变后生成的异常致病蛋白PrP^Sc(Scrapie Prion Protein，痒病型朊蛋白)。PrP^C在哺乳动物体内广泛存在，主要位于神经和淋巴细胞表面。PrP^C是一种糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的膜蛋白，由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区三部分组成。PrP^Sc是PrP^C构象转变产物，即PrP^Sc与PrP^C具有相同的氨基酸序列，共享一些抗原表位。研究表明，PrP^C对蛋白酶K(PK)消化敏感，在PK的作用下被完全降解，不再与抗体发生反应。而PrP^Sc具有部分抗PK消化的能力，被降解成为分子量在27-30Kda之间的蛋白，该蛋白被命名为PrP27-30，它仍然保持强的反应原性，与相应的抗体发生反应。研究进一步表明，PrP27-30是朊病毒具有感染性的核心片段。所以，根据PrP^Sc和PrP^C两者对PK消化的不同反应，运用针对PrP27-30的抗体即可检测出PrP^Sc的存在，从而诊断疯牛病等海绵状脑病。