[发明专利]肿瘤相关抗原19－9化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种肿瘤相关抗原19-9化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

肿瘤是一类严重威胁人类生命和健康的恶性疾病。WHO指出及早诊断和治疗是对抗肿瘤的有效手段之一。

目前发现的肿瘤标志物已经有一百多种，由于大多数情况下体内肿瘤标志物的含量都非常低，一般的检测方法很难对其进行精确的定量。肿瘤相关抗原19-9(CA19-9)是一种黏液型糖蛋白，其对胰腺、胃、结肠等消化系统肿瘤的诊断有较高的价值。因此，如何能够有效地在肿瘤诊断中应用CA19-9一直是人们关注并希望解决的问题。

1979年Koprowski将人的结肠癌细胞株sw1116细胞表面分离出来的单唾液酸神经节糖苷脂(monosiloganglioside)作抗原，制成相应的单克隆抗体1116-Ns-19-9，用此单克隆抗体识别的肿瘤相关抗原即称为CA19-9。血清CA19-9可作为胰腺癌、胆囊癌、胃癌、结肠癌、肝癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标。胚胎期胎儿的胰腺、胆囊、肝、肠等组织存在这种抗原；正常人体组织中含量很低；在消化道恶性肿瘤，尤其是胰腺癌、胆囊癌病人血清中，CA19-9含量明显增高，但早期诊断价值不大，主要作为病情监测和预示复发的指标。此外，对消化道疾病鉴别诊断，如急性胰腺癌、胆囊炎、肝炎等CA19-9也有不同程度的升高。CA19-9是胰腺癌的敏感标志物，与CEA联用对胃肠道肿瘤的诊断更有价值。CA19-9在卵巢癌、淋巴瘤、胃癌、肺癌、食道癌和乳腺癌的阳性率约30％。大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明显增高；肝胆系癌、胃癌、结直肠癌的CA19-9水平也会升高。

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。其中技术工艺成熟，实用性强，易于推广的主要有：放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和化学发光免疫分析等四种。这些检测技术的基本理论大体相同，但是所用示踪剂及所发出的信号各不相同，因此各有优缺点。其中，放射免疫分析法灵敏度高，但存在操作复杂、测定结果不稳定、试剂保存时间短、放射性污染等缺点。酶联免疫分析克服了放射免疫分析的很多局限性，但灵敏度不够高。

现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明是在酶免疫分析的基础上应用酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替酶免疫分析中的显色底物，因而其灵敏度大大提高，并且操作简便适用性广，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。

发明内容

本发明同时解决了上述问题，即将化学发光检测技术与CA19-9的免疫分析学有效地结合，提供了一种能够简便、快速、灵敏、特异、稳定地检测CA19-9的试剂盒，该试剂盒适于在产业上有效地推广应用。

本发明的目的是提供一种肿瘤相关抗原19-9化学发光免疫分析测定试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

根据本发明的试剂盒包括：1)肿瘤相关抗原19-9校准品；2)包被有肿瘤相关抗原19-9单克隆抗体的固相载体；3)辣根过氧化物酶标记的肿瘤相关抗原19-9单克隆抗体；以及4)上述酶所作用的化学发光底物。

根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。

根据本发明的试剂盒，其中，所述化学发光底物为鲁米诺或鲁米诺的衍生物。

优选地，上述试剂盒中，所述鲁米诺的衍生物为异鲁米诺或7-氨基-6-巯基邻苯二甲酰肼。

进一步，本发明提供了一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

1)以肿瘤相关抗原19-9纯品配制肿瘤相关抗原19-9校准品；

2)以肿瘤相关抗原19-9单克隆抗体包被固相载体；

3)以辣根过氧化物酶标记肿瘤相关抗原19-9单克隆抗体；

4)配制化学发光底物；

5)分装上述肿瘤相关抗原19-9校准品、辣根过氧化物酶标记的肿瘤相关抗原19-9单克隆抗体和该酶所作用的化学发光底物；以及

6)组装为成品。

根据本发明的方法，优选，所述包被固相载体的步骤2)包括以下步骤：

1)包被