[发明专利]一种哺乳类精子头后部膜蛋白的分离方法及其应用

权利要求书

1.哺乳类精子头后部膜蛋白的分离方法，包括以下步骤：

1)制备顶体反应后精子头；

2)将步骤1)制备的顶体反应后的精子头在由pH为7.2-7.6、浓度为10-20mM的Tris·Cl和100μg/ml PMSF组成的低渗液中冰浴，然后离心回收得到低渗精子头；

3)将步骤2)回收的低渗精子头在三去污裂解液中冰浴，然后离心回收上清液即得到哺乳类精子头后部膜蛋白；所述三去污裂解液含有pH为8.0、浓度为50mM的Tris·Cl，150mM NaCl，0.1g/100ml SDS，体积百分含量为1％NP-40，0.5g/100ml去氧胆酸钠，100μg/ml PMSF，1μg/ml Aprotinin和0.02g/100ml NaN₃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述制备顶体反应后精子头的方法包括下述步骤：用添加10mM咖啡碱的BO液或者TALP溶液悬浮牛精子至10⁶-10⁷个/ml，加入2-10μM钙离子载体A₂₃₁₈₇或者1-2μM 5-Br-A₂₃₁₈₇，在38.5-39℃，5％CO₂条件孵呼育0.5-2小时进行充分的顶体反应，然后在4℃，800g以上，离心，得到的沉淀即为顶体反应后的精子；

将顶体反应后的精子用PBS重悬至10⁵-10⁶个精子/ml，然后做冰水浴超声处理直至95％以上的精子从颈部断开，在1000-1500g，离心，用PBS离心洗涤，得到的沉淀即为精子头。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述精子为牛精子，所述精子头后部膜蛋白为牛的精子头后部膜蛋白。

4.权利要求1-3中任意一项所述的方法制备的精子头后部膜蛋白。

5.由权利要求4所述的精子头后部膜蛋白得到的多克隆抗体。

6.由权利要求4所述的精子头后部膜蛋白得到的单克隆抗体。

7.根据权利要求6所述的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体为杂交瘤细胞系sp18 mAb CGMCC No.0906分泌的单克隆抗体。

8.一种精子疫苗，它的活性成分是权利要求4所述的精子头后部膜蛋白。

9.杂交瘤细胞系sp18 mAb CGMCC No.0906。