[发明专利]一种用于检测肿瘤标志物CA50的免疫放射分析试剂盒及其应用方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测肿瘤标志物CA50的免疫放射分析试剂盒及其应用方法。

背景技术

癌症对人类的生存健康构成了严重威胁。目前肿瘤治疗的关键在于早期发现、早期治疗，这已是人们的共识。随着肿瘤早期诊断进入蛋白质时代，越来越多肿瘤标志物的发现为建立发展快速、高灵敏、高特异肿瘤标志物的新型检测技术提出了更高的要求。糖类蛋白50(CA50)主要分布于糖脂和糖蛋白中，是一种广谱的肿瘤糖类抗原，属鞘糖脂类肿瘤标志物，其对多种上皮类恶性肿瘤有较高的阳性检出率。通常在消化道肿瘤的病人中可以观察到血清中CA 50含量的升高，将其与CEA、CA125、CA199等标志物联检，可为疾病的前期筛查、辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察、癌细胞转移以及预后提供有参考价值的依据。

在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的背景中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。免疫磁性微粒子技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒子作载体，以化学偶联法包被上具有特异性亲和力的各种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其致敏为免疫磁性粒子，具有分离速度快、效率高、可重复性好；操作简单、不需要昂贵的仪器设备；不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

发明内容

本发明的目的在于通过一种检测CA50的二抗包被磁性微粒子免疫放射分析方法，即将驴抗鼠或兔抗鼠抗抗体、亲和素、抗FITC抗体中的任一种偶联或包被于磁颗粒表面作为反应固相，并对应捕获溶液中的免疫夹心物，形成抗抗体-单抗-抗原-单抗、亲和素-生物素化单抗-抗原-单抗、抗FITC抗体-FITC标记单抗-抗原-单抗等三种双夹心免疫复合物，洗涤分离后，根据放射性计数对样品中CA50进行定量测定。

本发明提供了一种检测CA50的二抗包被磁性微粒子免疫放射分析试剂盒，其中包括包被有二抗的磁性微粒子；标记的CA50单克隆抗体及¹²⁵I标记的CA50单克隆抗体混合而成的标记物液；CA50标准品溶液及质控品；浓缩洗涤液。

其中二抗指的是驴抗鼠或兔抗鼠抗抗体、亲和素、抗FITC抗体中的任一种，根据二抗体系的不同，试剂盒的组成可以具体表述为：(1)包被有驴抗鼠或兔抗鼠抗抗体的磁性微粒子；抗CA50单克隆抗体及¹²⁵I标记的抗CA50单克隆抗体混合而成的标记物液；CA50标准品溶液及质控品；浓缩洗涤液；(2)包被有亲和素的磁性微粒子；生物素标记的抗CA50单克隆抗体及¹²⁵I标记的抗CA50单克隆抗体混合而成的标记物液；CA50标准品溶液及质控品；浓缩洗涤液；(3)包被有抗FITC抗体的磁性微粒子；FITC标记的抗CA50单克隆抗体及¹²⁵I标记的抗CA50单克隆抗体混合而成的标记物液；CA50标准品溶液及质控品；浓缩洗涤液。

本发明中包被二抗的磁性微粒子为粒径为2-3μm、使用浓度为5-10mg/mL、内核为四氧化三铁(Fe₃O₄)、表面包裹带有活性基团如氨基(NH₂-)、羧基(-COOH)的聚合物；所述二抗的包被是通过戊二醛两步法将磁性微粒子与二抗进行偶联，并以含有0.5％牛血清白蛋白(BSA)、1％酪蛋白的pH为7.2，0.02mol/L的磷酸缓冲液进行封闭完成。

当本发明中包被二抗为驴抗鼠或兔抗鼠抗抗体时，所用两株抗CA50单克隆抗体一株不必标记，一株标记¹²⁵I。

当本发明中包被二抗为亲和素时，所用两株抗CA50单克隆抗体一株标记生物素，一株标记¹²⁵I。所述生物素的标记是以碳化酰二亚胺法制备生物素与单抗的偶联物。生物素标记物形式可为冻干粉、浓缩液和工作液；所述生物素标记抗体液以20％小牛血清稀释存放。

当本发明中包被二抗为抗FITC抗体时，所用两株抗CA50单克隆抗体一株标记FITC，一株标记¹²⁵I。所述FITC的标记是以碱性液标记法制备FITC与单抗的偶联物。FITC标记物形式可为冻干粉、浓缩液和工作液；所述FITC标记抗体液以20％小牛血清稀释存放。

本发明中¹²⁵I标记抗体采用氯胺T法进行，¹²⁵I和标记物应妥善保管。