[发明专利]一种冠心病和中风风险诊断试剂盒及其制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，具体涉及一种冠心病和中风风险诊断试剂盒的制作方法。

背景技术

来自卫生部统计资料：全国36个市全市或部分市区疾病监控结果表明，慢性病是中国人群最主要的死因，占总死亡人数约70％，其中心脑血管为第一位，恶心肿瘤为第二位，糖尿病成为危害人类健康的“第三大杀手”。

心脑血管病作为危害人类健康的“第一杀手”，已波及全球，是许多富裕国家的主要灾难。由于冠心病的某些类型的诊断尚有一定困难，故通常以急性心肌梗塞的发病率和死亡率来代表冠心病的发病和死亡，其中以死亡率更为常用。目前，虽然治疗冠心病有介入技术、干细胞技术、药物洗脱支架等，但专家强调，预防胜于治疗。靠发展现代化的冠心病急救和治疗技术是不够的，建立冠心病人群的诊断防治技术和防治体系迫在眉睫。而中风是心脑血管病发病的主要表现之一，我国是中风高发国家，每年新发200万。而最可怕的是即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍有2/3病人致死或致残，现存活的中风患者累积700万。另外，据卫生部有关资料统计，我国心脑血管病每年耗费约3000亿元人民币。无疑随着人口的老化，心脑血管疾病将是一个巨大的社会和经济负担。近30年来国内外许多研究都已证明，对心脑血管病最有效的治疗莫过于早期诊断以预防为主、防治结合。

最新的临床和流行病学的研究证实，50％冠心病患者的总胆固醇水平低于人群正常值，因此一定有其它更重要的因素导致冠心病的发生。进一步的研究表明血管炎症是引起冠心病的重要病因之一，因为动脉粥样硬化始于动脉内皮细胞受损，引起内皮功能紊乱，进而引起一系列的免疫和炎症反应，如血管通透性增加，细胞介素和生长因子增多，巨噬细胞聚焦于血管受损处，最终形成硬化斑块。因此寻找新的特异性的与冠心病发病有关的炎症标记物将对冠心病及中风的预测和防治有很重要的作用。

Lipoprotein-associated phospholipase A2(Lp-PLA₂)是血液中一钙非依赖性的磷酯酶，大量科学研究和大型流行病学研究已证实其为一种全新、独立于已知冠心病和中风危险因素的风险指标。Lp-PLA₂主要源于巨噬细胞，在血浆中主要与低密度脂蛋白(LDL)结合，可水解氧化型LDL而产生两种炎症介质，如溶血磷酯酰胆碱(Lyso-PC)和氧化型脂肪酸。Lyso-PC可促使内皮细胞功能紊乱，巨噬细胞增多，促进T细胞和单核细胞聚集，细胞介素和CD40配体表达增加，并对平滑肌细胞有很强的毒性。西苏格兰冠心病预防研究(West ofScotland Coronary Prevention Study，WOSCOPS)，在五年里随访了6595例男性高胆固醇的患者，发现血清中高水平的Lp-PLA₂与冠心病的首次发作在统计学上有显著地关联性。血清中Lp-PLA₂高的患者冠心病发生的机率是正常者的两倍。与传统的血清指标，如LDL、总胆固醇、白细胞数和纤维蛋白原相比，Lp-PLA₂是预测冠心病发作最好的指标。这一结论也被另一个著名的研究所证实。动脉粥样硬化风险研究(Atherosclerosis Risk in Community，ARIC)在6-8年里，随访了12819例健康受试者和609例冠心病患者。此项研究得出与WOSCOPS相似的结论，即Lp-PLA₂是一特异的，独立的预测冠心病发生的重要指标。

因此，倘若我们能采用有效的诊断试剂对人群进行定期检测则完全可以在心脑血管疾病发病前就预防和控制住。而冠心病和中风风险诊断试剂盒利用特异和高度灵敏免疫检测法(ELISA)来定量检测人血清或血浆中的Lp-PLA₂的含量，进而用于预测冠心病，缺血性心肌梗死及中风的危因。对于病情的预测、预防具有重要的临床意义和社会经济效益。

发明内容

本发明是为了能快速、简便地检测血清或血浆中的Lp-PLA₂的含量，而提供一种操作简便、能准确预测冠心病及中风风险的诊断试剂盒及其制作方法和使用。本试剂盒是一种用酶联免疫法定量分析人血浆或血清中Lp-PLA₂水平，与临床评估、病人患病风险率估计相结合，用于预测冠心病及与中风的发生。

本发明所述的诊断试剂盒所需主要试剂和辅助用品如下：

1.1 试剂

1.1.1 包被缓冲液：0.05M(pH9.6)碳酸盐缓冲液

1.1.2 洗涤缓冲液：0.15M(pH7.4)PBS