[发明专利]稳定的干扰素组合物

说明书

本申请是国际申请号PCT/US 01/47514，国际申请日为2001年11月7日、中国国家阶段申请号01820698.0，名称为“稳定的干扰素组合物”的发明专利申请的分案申请。

发明的技术领域

本发明一般是涉及药物的组合物，更具体涉及蛋白质的稳定的液体或冻干的制剂，包括干扰素-β制剂。

发明的背景

干扰素是一个糖蛋白家族，它们自细胞的分泌由许多信号所诱导，这些信号包括病毒，双链RNA，其他的多核苷酸，抗原和有丝分裂原。干扰素呈现出各种各样的生物活性，包括抗病毒，抗增殖以及免疫调节活性。至少已经有三种不同类型的人类干扰素，α，β和γ，依据许多因素被区分开来，包括抗病毒和抗增殖活性。

干扰素-β(IFN-β)第一个被确认对于治疗多发性硬化症(MS)有效，并证实能减少那些复发和缓解型MS病人的发作次数，干扰素-β组合物在乙型和丙型肝炎感染的治疗中也十分有用。

和所有以蛋白质为基础的药物一样，在把干扰素-β当作治疗药物的使用过程中必须克服的主要障碍之一就是由于它的药物制剂的不稳定性所导致的药物作用的丧失。威胁到药物制剂中多肽的活性和疗效的物理不稳定性包括变性，可溶以及不可溶的聚集物的形成，化学的不稳定性包括水解，形成酰亚胺，氧化，消旋和脱酰胺作用。已经知道这些变化中的一些变化能导致感兴趣的蛋白质的药物活性的降低或丧失。在其他的情况下，这些变化的确切效应还不为人知，但是所产生的降解产物由于它的潜在的不良副作用而不能被作为药物接受。

药物制剂中多肽的不稳定性直接影响它们的药理作用，正如为批准以蛋白质为基础药物而提出的标准强调多肽的活性和分子特征的改变必须最小。例如，1995年11月30号，国际人用药物注册技术要求协调会议(一个欧盟，日本和美国三方组织，从事制订与药物相关的政策建议供实施)提出的关于生物技术，生物产品稳定性试验的报告中指出：无论什么地方经过长期的，加速的，和/或应激的稳定性研究而发现有意义的质或量的改变，这种改变表明降解产物形成，就应该讨论潜在的危险以及考虑在长期稳定性方案中鉴定和定量降解产物。

结果是需要另外的蛋白质药物组合物，包括干扰素-β组合物，包含生理上相容的稳定剂，能够大大的减少杂质，以达到稳定蛋白质和提高药理作用的目的。

                          发明概述

提供了包含作为治疗活性成份的干扰素-β和作为赋形剂的高度提纯的甘露醇的组合物，与包含非高纯度的甘露醇的干扰素-β组合物相比它以在储存过程中稳定性提高为特征。还提供了制备这些组合物的方法。

                          附图的概述

图1是对利用葡萄糖制备的干扰素-β粉状物和在50℃下保温一周的冻干粉末的RP-HPLC色谱图的对比。保持50℃的制剂中可以看到糖基化的干扰素-β加合物的形成出现在第二个(B1)峰(大约在流份48)，在干扰素-β主峰(大约在流份49-50)之前。见例1。

图2是利用葡萄糖配制的干扰素-β粉状物的谱图。可以发现除了在19878amu(原子质量单位)有干扰素-β的主峰外还有一些小峰。见例1。

图3是从粉状组合物冻干并在50℃下储存一周后的以葡萄糖配制的干扰素-β样品的质谱图。和图2对比，几个主要的峰是代表干扰素-β加合物的。见例1。

图4是对用USP甘露醇配制的干扰素-β粉状物和在50℃下保温一周的冻干粉末的RP-HPLC色谱图的对比。保持在50℃下的制剂未见糖基化干扰素-β加合物的形成(出现B1峰)。见例1。

图5是利用USP甘露醇配制的干扰素-β粉状物的质谱图。干扰素-β在19880amu可以发现有一峰。见例1。

图6是利用USP甘露醇配制的低压冻干的干扰素-β粉末在50℃下保温一周的质谱图。在图中可看见另外的峰的形成(代表加合物)。见例1。

图7是用未提纯的甘露醇配制的干扰素-β的质谱图。在谱中能看见许多另外的峰的形成(代表加合物)。见例1。

图8是以甲醇提取过的甘露醇配制的干扰素-β的质谱图，这种甘露醇和图7使用的是同一批。加合物峰的大小和数量都大量减少。见例1。

图9是利用高纯度的甘露醇(经甲醇提取，碳处理，超滤，重结晶)配制的干扰素-β制剂的质谱图。除了代表未改变的干扰素-β的主峰外只能看到三个小峰。见例1。