[发明专利]用动态散斑照明实现准共焦荧光显微的方法及装置

权利要求书

1.一种利用激光散斑图案照明样品，在无需扫描的情况下，实现准共焦荧光显微的方法。

2.根据权利要求1所述的方法，所用激光器是氩离子激光器，输出波长488nm，输出功率20mW。

3.根据权利要求1和2所述的方法，所用的氩离子激光器可以是连续输出，也可以是脉冲输出；激光器的输出波长可以是458nm，476nm，488nm和514nm；激光的输出功率可以是从5mW到10W。

4.根据权利要求1所述的方法，所用激光器可以是二极管激光器，输出波长在350nm到1000nm，输出功率从1mw到20W。

5.根据权利要求1、2、3和4所述的方法，所用激光器可以是其它的固体、气体和化学激光器，输出波长可调谐，连续或脉冲输出，激光器输出激光的波长范围从350nm到1000nm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征是所用的散射体具有一定的颗粒度、散射角和透过率参数。

7.根据权利要求1和6所述的方法，采用步进电机控制散射体的旋转角度，产生动态变化的散斑图案。

8.根据权利要求1和7所述的方法，可采用一维、二维或三维控制台带动散射体，产生动态的散斑照明图案。

9.根据权利要求1和6所述的方法，采用光学系统将带有散斑图案的光束进行扩束、整形后耦合进入荧光显微镜，被双色镜反射到物镜，聚焦到样品上产生动态的散斑照明图案。

10.根据权利要求1和9所述的方法，应根据激发光源的波长以及研究样品的不同，在荧光显微镜中选用不同的双色分束镜。

11.根据权利要求9和10所述的方法，样品所发出的荧光用显微镜物镜收集后，通过双色镜并经过滤光片后被CCD相机接收。

12.根据权利要求1和11所述的方法，CCD相机前的滤光片应该能够阻挡激发光，对样品所发出的荧光具有高的透过率。

13.根据权利要求1、9、10、11所述的方法，所用的荧光显微镜既可以是整个系统的一个整体设计部分，也可以是对单独的荧光显微镜的光路改造；荧光显微镜可以是正置的，也可以是倒置的。

14.根据权利要求1、11和12所述的方法，接收荧光图像的CCD相机即可以是制冷的、也可以是常温工作的。

15.根据权利要求1、11、12和14所述的方法，接收荧光图像的相机还可以是CMOS相机和其它各种摄像机。

16.根据权利要求1、11、12、14和15所述的方法，所用的相机可以是带有增强器。

17.根据权利要求1、6、7、8、9和11所述的方法，利用计算机或其它的机械的或光电的手段，改变在样品上的散斑图案，并依次记录一系列样品的荧光图像。

18.根据权利要求17所述的方法，采用均方根或方差法等数据处理方法，从所获得的一系列荧光图像中，提取出样品上激发光聚焦面的层析图像。

19.根据权利要求18所述的方法，可通过横向或纵向移动样品，以获取样品不同位置或不同深度的层析图像，实现无需进行激发光扫描的高空间分辨三维层析成像。