[发明专利]一种RNAi载体及其应用有效
| 申请号： | 200710099146.6 | 申请日： | 2007-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN101067139A | 公开（公告）日： | 2007-11-07 |
| 发明（设计）人： | 杨峥嵘;黄来强;王海峰 | 申请（专利权）人： | 清华大学深圳研究生院 |
| 主分类号： | C12N15/86 | 分类号： | C12N15/86;A61K48/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 518055广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 rnai 载体 及其 应用 | ||
1.一种RNAi载体，是在SFV载体骨架中含有CMV IE启动子和Sv40 poly A的重组SFV表达载体；在所述重组SFV载体骨架中，所述CMV IE启动子替换原SP6启动子，且位于SFV病毒基因5’末端非翻译区的上游，所述Sv40 poly A位于SFV 3’末端非翻译区下游；所述CMV IE启动子是GenBank号为：U57607.1中的第1-589位核苷酸；所述Sv40 poly A是GenBank号为：AM697713中的第2404-2644位核苷酸；将所述重组SFV表达载体骨架中SFV病毒基因的3’末端非翻译区的重复序列去除，在26S亚基因组启动子下游添加shRNA表达元件；所述shRNA表达元件自上游至下游依次包含一个RNA pol III启动子、一个多克隆位点和由5-6个碱基T组成的终止信号；所述RNA pol III为人或鼠的U6RNA启动子、H1RNP RNA启动子，或tRNAval启动子、tRNAmet启动子。
2.根据权利要求1所述的RNAi载体，其特征在于：所述tRNA启动子为tRNAmet启动子MTD。
3.根据权利要求1所述的RNAi载体，其特征在于：在所述shRNA表达元件中的多克隆位点和终止信号之间还包含一个真核抗性基因选择复合体；所述真核抗性基因选择复合体自上游至下游依次包含一个SV40早期启动子、一个抗生素抗性基因以及一个HSV-TK Poly A；所述SV40早期启动子是GenBank号为：X99274中的第6850-7187位核苷酸，HSV-TK Poly A是GenBank号为：AB242435中的第3867-3885位核苷酸。
4.根据权利要求3所述的RNAi载体，其特征在于：所述抗生素抗性基因为Neomycin、Zeomycin、Hygromycin或GFP/Neo抗性基因。
5.根据权利要求1-4任一项所述的RNAi载体，其特征在于：用于构建所述RNAi载体的出发载体为pSFV-1或pSFV-3。
6.权利要求1-4任一项所述的RNAi载体在制备抑制靶基因表达的基因治疗性药物中的应用。
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