[发明专利]一种卵母细胞石蜡切片的制备方法有效
申请号: | 200710098623.7 | 申请日: | 2007-04-23 |
公开(公告)号: | CN101144760A | 公开(公告)日: | 2008-03-19 |
发明(设计)人: | 李赞东;蒋斌;杜美红;韩海棠;赵晨 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28;G01N33/48 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人: | 张庆敏 |
地址: | 100083*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 细胞 石蜡 切片 制备 方法 | ||
1.一种卵母细胞切片的制备方法,该方法包括如下步骤:
1)固定:将卵母细胞样本用吸管转移到含有固定液的无色透明器皿中固定过夜;
2)脱水及透明处理:用移液枪将卵母细胞从固定液中吸出,经脱水后,用移液枪将脱水后的卵母细胞转移到含有透明处理液的无色透明器皿中进行透明处理;
3)包埋及切片:将透明处理后的卵母细胞用移液枪转移到模盒中,去除透明处理液,露出卵母细胞,在卵母细胞周围点上染料,经石蜡包埋后切片。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的无色透明器皿为玻璃器皿。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的移液枪枪头口径比卵母细胞的直径大200~300微米。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤1)中所述的固定液为10%的甲醛溶液或80-95%的乙醇溶液或5%醋酸溶液;其中步骤2)中所述的透明处理液为二甲苯、苯、甲苯或氯仿。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤2)中脱水的方法是采用75%,85%,95%以及100%的酒精逐级脱水。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤3)中所述的染料为伊红、品红、番红或次甲紫。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤3)中石蜡包埋的方法是用将融化的石蜡注入模盒包埋卵母细胞,浸蜡40min后置于-20℃冰箱速冻30分钟成型。
8.如权利要去1所述的方法,其特征在于步骤3)中切片地方法是将成型的石蜡块从模盒中取出,置于手动轮转切片机上卡住,先进行粗镟,看见有色颗粒后将切片厚度调整为5μm,连续切片,用毛笔将连续切片挑入温水槽中展平,用镊子挑取完整的切片,贴附于载玻片上,50℃烘箱中烤片40min。
9.如权利要求1~8所述的方法,其特征在于所述的卵母细胞为禽类卵母细胞。
10.由权利要求1~9所述的方法制备得到的卵母细胞石蜡切片。
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