[发明专利]检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法

说明书

技术领域

本发明涉及人泌尿生殖道分泌物中病原体的检验，尤其涉及一种检测人泌尿生殖道病原体的引物、探针及方法。

背景技术

随着我国对外开放程度的逐步加深，加上社会上有些人受到“性自由”思想的影响和对性传播疾病的无知，在一些开放城市和经济发达地区陆续出现了新的性病患者，加之当今各地之间的人员流动非常频繁，性病的发生及传播呈愈演愈烈之势。如2004年全国31个省(直辖市、自治区)共累计报告性病(HIV/AIDS除外)809，550例，较上一年就上升了10％。

2004年全国性病疫情分析报告显示，淋病奈瑟氏球菌(简称淋球菌，NG)、解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)已成为三种主要的导致性病的病原体。对本市部分就诊者的检测显示，合并2种或3种病原体感染的患者正在逐年增加。性传播疾病对人类健康的危害性很大。特别是对青年人，后果更为严重，有的会导致终身的健康问题，包括不孕、不育、慢性疼痛以及增加感染艾滋病的危险，对人们的身心健康和家庭社会构成了严重的威胁。对性传播疾病实行早期监测和诊断，是性病防治工作中的一个重要组成部分，对于提高性病治愈率，缩短病程和传染期，控制和消灭传染源，阻止性疾病的蔓延有着重要的作用。

目前对淋病奈瑟氏球菌、解脲支原体和沙眼衣原体的检验方法主要有涂片检查，细菌和细胞培养、血清学试验和PCR法。涂片检查是检测淋球菌的主要方法，但尿道分泌物的状态会影响检测的敏感度；细菌和细胞培养是将标本接种于合适的培养基或细胞，使其扩增，并进一步作出鉴定。培养法特异性高，能检出病人分泌物内活的病原体，结合药敏试验能作为药物疗效的判断，过去常作为检测的金标准。但由于受专业化技术、试剂、设备、周期长等因素的影响，目前临床一般不采用，仅在科研单位进行科研活动，或作为新诊断试剂方法学评价的金标准；血清学试验可以提供快速诊断，曾被认为是一种理想的诊断方法，但因为敏感性和特异性不够高，进口抗体的昂贵价格而不能用于过筛实验；PCR法用于感染早期的病原体诊断，已逐渐成为病原体检测的新宠。PCR法操作简单、耗时较少、灵敏度高，理论上只要有一个拷贝便可被检出。但是作为高度敏感的扩增实验，操作不当极易造成污染而出现假阳性的结果。

近年来出现的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它基本解决了过去实验过程因污染出现的假阳性。实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR技术中，特异性荧光探针的选择和设计是至关重要的。它是把荧光化合物标记到特异性的寡核苷酸上形成荧光标记的DNA探针，通过探针与PCR产物特异性的结合，在PCR过程中可对产物实现均相、实时、定量检测。根据荧光基团标记和实现能量共振转移方式的不同，荧光PCR所用的探针可以分为五大类，分别是：Taqman探针，分子信标，光标记引物，杂交探针，DNA-RNA-DNA嵌合探针。

在实时荧光定量PCR技术中，定量PCR仪的发展是另一决定因素。多色多通道检测是当今的主流趋势，多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，使得在单管内可同时检测多模板。目前，在大部分医院都具有多通道的荧光PCR仪。此外，为满足多色多通道检测的需求，目前已开发了包括FAM，TET，VIC，HEX等近十种的荧光基团。

但是，目前几乎所有临床上使用的都是单检PCR产品，一次只能检测出一种病原体，不利于对混合感染的检测，而且操作过程相对费时，成本高。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的引物。

本发明要解决的技术问题之二是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的探针。

本发明要解决的技术问题之三是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的方法。

本发明要解决的技术问题之四是提供一种检测人泌尿生殖道病原体的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种检测人泌尿生殖道病原体的引物，包括以下引物对中的至少一对：

(1)用于扩增淋病奈瑟氏球菌靶核酸序列的引物对，其第一引物序列含有SEQ ID NO：1的至少15个连续核苷酸，其第二引物序列含有SEQID NO：2的至少15个连续核苷酸；