[发明专利]单个细胞的基因表达定量方法

权利要求书

1.核酸检测方法，其中包括：

从含有至少单个细胞的试样以不破碎地获取单个细胞的步骤、

溶解获取的单个细胞的细胞膜，使该细胞中的核酸溶出的细胞溶解步骤、

在溶出了的核酸中，通过DNA分解酶使DNA分解的DNA分解步骤、

使该单个细胞中所含的RNA中的mRNA与固定在载体上的聚合度为5～40的寡(dT)杂交的步骤、

对与寡(dT)杂交了的mRNA进行逆转录反应，制作由来自单个细胞的cDNA固定在载体上得到的来自单个细胞的cDNA固定化载体文库的步骤、和

边进行针对固定在载体上的cDNA的扩增反应，边进行扩增量的检测的步骤。

2.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，在1个管内进行以下步骤：

细胞溶解步骤、

DNA分解步骤、

使该单个细胞中所含的RNA中的mRNA与固定在载体上的寡(dT)杂交的步骤、和

对与寡(dT)杂交了的mRNA进行逆转录反应，制作由来自单个细胞的cDNA固定在载体上得到的来自单个细胞的cDNA固定化载体文库的步骤。

3.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，在边进行针对固定在载体上的cDNA的扩增反应，边进行扩增量的检测的步骤之后，还包括：

回收载体、洗涤的步骤a、和

边进行针对固定在载体上的cDNA的扩增反应，边进行扩增量的检测的步骤b。

4.权利要求3记载的核酸检测方法，其中，在步骤b之后，还具有重复步骤a以及步骤b的步骤。

5.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，制备来自单个细胞的cDNA固定化载体文库的步骤中，使单个细胞中所含的mRNA实质上全部杂交。

6.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，载体是粒子，使用的粒子的总表面积在0.1cm²以上。

7.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，载体是粒子，扩增反应溶液中粒子的体积占有率在1％以下。

8.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，载体是粒子，扩增反应溶液中粒子的体积占有率在0.1％以下。

9.权利要求1记载的核酸检测方法，其中，固定在载体上的寡(dT)的总分子数量在10¹²个分子以上。

10.权利要求6～9的任一项记载的核酸检测方法，其中，粒子的粒径是1μm，粒子数是10⁷～10⁸。

11.权利要求6～9的任一项记载的核酸检测方法，其中，粒子的粒径是2.8μm，粒子数是10⁶～10⁷。

12.权利要求6～11的任一项记载的核酸检测方法，其中，粒子是磁珠。

13.核酸检测方法，其中包括：

从含有细胞的试样以不破碎地获取10³个以下的多个细胞的步骤、

溶解获取的细胞的细胞膜，使该细胞中的核酸溶出的细胞溶解步骤、

在溶出了的核酸中，通过DNA分解酶使DNA分解的DNA分解步骤、

使该细胞中所含的RNA中的mRNA与固定在载体上的聚合度为5～40的寡(dT)杂交的步骤、

对与寡(dT)杂交了的mRNA进行逆转录反应，制作来自该细胞的cDNA固定在载体上得到的cDNA固定化载体文库的步骤、和

边进行针对固定在载体上的cDNA的扩增反应，边进行扩增量的检测的步骤。