[发明专利]一种可用于检测猪圆环病毒2型抗体的Cap抗原的制备方法无效
| 申请号： | 200710075255.4 | 申请日： | 2007-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN101101296A | 公开（公告）日： | 2008-01-09 |
| 发明（设计）人： | 刘湘涛;尹双辉;尚佑军;孙世琪;刘艳红 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/53 |
| 代理公司： | 深圳市中知专利商标代理有限公司 | 代理人： | 吕晓蕾 |
| 地址： | 730046甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 圆环 病毒 抗体 cap 抗原 制备 方法 | ||
1.一种制备可用于检测猪圆环病毒2型抗体的Cap抗原的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1).PCR克隆PCV2 ORF2的编码基因；
(2).构建重组表达载体rCap；
(3).在改良的LB液体培养基中诱导rCap表达；
(4).纯化rCap蛋白；
其中所述改良的LB液体培养基包含6-9g/L蛋白胨、6-9g/L氯化钠以及2-4g/L酵母提取物。
2.权利要求1的方法，其特征在于，其中所述改良的LB液体培养基包含8g/L蛋白胨、8g/L氯化钠以及4g/L酵母提取物。
3.权利要求1的制备方法，其特征在于，其中所述步骤(3)诱导rCap表达所使用的诱导剂为IPTG，其最终浓度为0.05-0.2mol/L。
4.权利要求3的方法，其特征在于，其中所述IPTG的最终浓度为0.1mol/L。
5.权利要求1的方法，其特征在于，其中所述步骤(3)诱导rCap表达的第一诱导温度为37℃，第二诱导温度为16-20℃。
6.权利要求5的方法，其特征在于，其中所述第二诱导温度为16℃。
7.权利要求1的方法，其特征在于，其中所述步骤(3)诱导rCap表达的第一诱导时间为3-6小时，第二诱导时间为12-20小时。
8.权利要求7的方法，其特征在于，其中所述第一诱导时间为4小时，第二诱导时间为18小时。
9.一种制备可用于检测猪圆环病毒2型抗体的Cap抗原的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1).PCR克隆PCV2 ORF2的编码基因；
(2).构建重组表达载体rCap；
(3).在改良的LB液体培养基中，依次37℃诱导和低温长时间诱导rCap表达；
(4).纯化rCap蛋白；
其中所述改良的LB液体培养基包含6-9g/L蛋白胨、6-9g/L氯化钠以及2-4g/L酵母提取物；诱导rCap表达所使用的诱导剂为IPTG，其最终浓度为0.05-0.2mol/L；诱导rCap表达的第一诱导温度为37℃，第二诱导温度为16-20℃；诱导rCap表达的第一诱导时间为3-6小时，第二诱导时间为12-20小时。
10.权利要求9的方法，其特征在于，其中所述改良的LB液体培养基包含8g/L蛋白胨、8g/L氯化钠以及4g/L酵母提取物；IPTG的最终浓度为0.1mol/L；诱导rCap表达的第一诱导温度为37℃，第二诱导温度为为16℃；诱导rCap表达的第一诱导时间为4小时，第二诱导时间为18小时。
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