[发明专利]分步酶法提取金耳多糖的新工艺

说明书

本发明涉及食药用菌多糖的生产工艺，特别是涉及以金耳子实体为原料的通过多种生物酶分步提取多糖的生产工艺，属生物制品生产技术领域。

背景技术

金耳(Tremella aurantialba)亦称黄金木耳，原为野生珍稀物种，自然分布于我国西藏、云南等地，是中国特有菌种。

金耳是一种珍贵的食药用真菌，具有很高的营养价值。金耳子实体口感润滑细腻，是高级宴会上的名贵佳肴，同时也是补益身心、延年益寿的著名滋补珍品。《本草纲目》中就记载“金耳”性温中带寒，味甘，具有化痰，止咳，定喘理气之功效。

研究发现，金耳子实体中含有丰富的金耳多糖，其组成的单糖主要有甘露糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖等。金耳多糖具有调节免疫功能、抗辐射伤害、抗溃疡和抗炎作用。动物实验证实，金耳多糖还具有抗肿瘤性和增强造血功能等生物活性，是一种重要的生物制药原料。

目前提取金耳多糖主要是用水浸提、酸碱液浸提等方法。由于金耳含有丰富的蛋白质、纤维素、果胶质等物质，形成了致密的子实体结构，在水浸提过程中溶液粘度极大，多糖的浸出率很低，而且提取的多糖中含有较多的蛋白质、果胶质、纤维素等杂质，严重影响了多糖的纯度。而用酸碱液法浸提金耳多糖，则容易破坏多糖的活性结构，降低多糖的生物活性。

本发明是在提取金耳多糖的过程中，利用果胶酶、纤维素酶、中性蛋白酶分步对金耳子实体浸提液进行酶解处理，经反复试验后，确定了各种酶的最适用量、酶解时间、温度和pH值，使子实体细胞内外的果胶质、纤维素、蛋白质等非多糖类大分子与金耳多糖分离，多糖得到充分的释放溶解。利用该工艺能在温和的生产条件下，使每种酶的活性达到最高，既可有效地提取到高纯度的金耳多糖，又能完整地保护多糖的分子结构和构像，最大程度地维持了其生物活性。分析结果表明：与传统的水浸提法相比，用分步酶法提取金耳多糖的多糖提取率从7.8％提高到14.3％，多糖中的蛋白质含量由13.3％降低到1.6％，产品的产量和质量都有了大幅度提高。

发明内容

本发明目的是通过以果胶酶、纤维素酶、蛋白酶分步处理金耳子实体，在温和的提取条件下高效提取具有良好生物活性的高纯度金耳多糖。

实现本发明目的的技术方案为：

1.初步水浸

将干燥的金耳子实体在粉碎机中粉碎至60目，备用。称取粉碎后的金耳子实体，按子实体∶蒸馏水＝1∶20的比例(质量比)加入蒸馏水，于80℃恒温水浴，充分搅拌，浸泡1.0小时。

2.金耳的果胶酶酶解过程

将上述金耳浸泡物的温度冷却至45℃，调pH值至4.5，加入相当于金耳子实体干品质量1.2％的果胶酶，酶解时间1.5小时。

3.金耳的纤维素酶酶解过程

在完成果胶酶酶解过程后，将金耳浸泡物的温度冷却至38℃，调pH值至3.5，加入相当于金耳子实体干品质量0.5％的纤维素酶，酶解时间3.0小时。

4.金耳的中性蛋白酶酶解过程

在完成纤维素酶解后，将金耳浸泡物的温度升至50℃，调pH值至4.0，加入相当于金耳子实体干品1.0％质量的中性蛋白酶，酶解时间2.0小时。

5.酶解物的处理

将完成上述分步酶解后的浸泡物加热到95℃，对残留酶进行灭活，同时补充蒸馏水，达到子实体∶蒸馏水＝1∶30(质量比)，充分搅拌浸泡，维持2.0小时。

6.浸提液的过滤

将浸泡物用8层纱布过滤，将滤液的体积浓缩5倍，备用。滤渣用10倍质量的蒸馏水重新浸泡1小时，8层纱布过滤，将二次滤液的体积浓缩5倍，滤渣弃去。将初次滤液和二次滤液合并，合并的滤液体积再浓缩2倍，经滤纸再次过滤，获得澄清透明的金耳多糖溶液。

7.金耳多糖的醇沉提取

在多糖溶液中加入3倍体积的95％的乙醇，充分搅拌20分钟，形成絮状金耳多糖沉淀，用离心机2000rpm离心10分钟，分离出多糖的沉淀，用分析纯甲醚和乙醇交替冲洗各1次后，真空干燥，获金耳多糖成品。

该发明技术原理是利用纤维素酶、果胶酶、蛋白酶分别在各自酶活力最高的操作环境下处理金耳水浸液，可有效地溶解细胞壁，水解纤维素、果胶质、蛋白质，使多糖充分溶解入水中，同时在温和的酶解操作条件下保证了多糖分子结构的完整性和生物活性，从而获得高性能的金耳多糖产品。

具体实施方式

称取1kg金耳干品，粉碎至60目的颗粒，加至盛有20kg蒸馏水的搅拌罐中，升温至80℃，搅拌1小时，使金耳颗粒充分浸泡，直至水溶液粘度明显增加。将上述金耳浸泡物的温度冷却至45℃，调pH值至4.5，加入12g果胶酶后充分搅拌，维持酶解时间1.5小时；再将金耳浸泡物的温度调节至38℃，调pH值至3.5，加入5g纤维素酶后充分搅拌，维持酶解时间3.0小时；此后将金耳浸泡物温度升至50℃，调pH值至4.0，加入10g中性蛋白酶，维持酶解时间2.0小时。最后加热到95℃，维持2.0小时，灭活所有酶试剂，同时补充蒸馏水，使搅拌罐中的蒸馏水达到30kg，充分搅拌浸泡，使多糖完全溶入水中。经8层纱布过滤，将滤液体积浓缩5倍，备用。滤渣用10kg蒸馏水重新浸泡1小时，8层纱布过滤，滤液体积浓缩5倍。将二次滤液合并后，体积再浓缩2倍，经滤纸过滤，获得澄清的多糖溶液。在溶液中加入3倍体积的95％乙醇，充分搅拌20分钟，形成大量絮状金耳多糖沉淀，用离心机2000rpm离心10分钟，将金耳多糖沉淀分离，并分别用150g的分析纯甲醚和乙醇各冲洗1次，真空干燥，获金耳多糖成品。